Культивирование трихомонад на безсывороточной питательной среде

Целью исследования было определение минимальной посевной дозы и изучение динамики накопления биомассы Trichomonas vaginalis (T.v.) при культивировании in vitro в жидкой безсывороточной питательной среде СВТ производства НИИЭМ им. Пастера.

T.v. (штаммы С6-3, С8-2, С8-4 и Ф1) были выделены от больных на той же среде. Достоверность выделенных культур была подтверждена морфологически и методом ПЦР-РВ с использованием диагностической тест-системы ЦНИИИЭМ. Все четыре штамма в течение первой недели культивирования имели активную подвижность, грушевидную или овальную форму, сильно отличались по размеру. Микроскопическое исследование окрашенных по Романовскому-Гимза препаратов выявило хорошо различимые свободные жгутики и аксостиль, у некоторых особей была отмечена мультиядерность. Для посева использовали двухсуточные культуры штаммов, выращенные на безсывороточной среде.

Объем посевной дозы составлял 0,1 мл материала на 1,0 мл среды. Количество клеток определяли методом прямого подсчета с использованием камеры Горяева, где учитывались только активно подвижные особи. Минимальное количество клеток T.v., обеспечивающее прирост биомассы определяли методом серийных разведений.

Культивирование вели при температуре 37 °С и заканчивали на 5 сутки при снижении накопления клеток, появлении слабо подвижных или неподвижных форм с зернистой цитоплазмой и плохо различимым ядром или лизисе клеток. Было показано, что в зависимости от количества вносимых клеток T.v. коэффициент прироста клеток сильно менялся.

При внесении 2 x 104 кл уже на третьи сутки происходил максимальный прирост биомассы до 2 x 106 кл. В дальнейшем происходили морфологические изменения и частичный лизис клеток. При внесении 2 x 103 кл количество трихомонад на третьи сутки составляло 1,25 x 106 кл, а на четвертые - 3 x 106 кл, на пятые сутки нарастание прекращалось и происходили морфологические изменения и частичный лизис клеток. При внесении 2 x 102 кл на третьи сутки количество клеток составляло 4,7 x 105 кл, на четвертые - 2,7 x 106 кл и на пятые - 3,2 x 106 кл. При посевной дозе из 2 x 101 кл в большинстве случаях удавалось достигнуть максимального прироста клеток 2 x 106 кл только на пятые сутки. Аналогичные результаты были получены для всех четырех штаммов. Таким образом, в результате проделанной работы было показано, что для культивирования на безсывороточной питательной СВТ достаточно менее 100 клеток T.v. на 1 мл среды.

Все материалы

ФБУН НИИ эпидемиологии
и микробиологии имени Пастера
Отдел новых технологий