Общие этапы в различных вариантах ИФА

В твердофазном ИФА один их специфических реагентов иммобилизуют на твердой фазе. Затем последовательно добавляют другие специфические реагенты, проводя после инкубации каждого из них промывку с целью удаления несвязавшихся компонентов. Один из специфических реагентов, так называемый конъюгат, содержит ферментную метку. Поэтому ферментативная активность образовавшегося на твердой фазе специфического комплекса будет пропорциональна концентрации каждого компонента этого комплекса, один из которых подлежит определению.

Разработанные варианты ИФА различаются типом твердой фазы и способами присоединения к ней первого специфического реагента, числом и последовательностью добавления остальных специфических реагентов, способом промывки твердой фазы, способом получения конъюгата, природой фермента в конъюгате, типом используемого субстрата, способом выражения результатов анализа и т.д. Тем не менее, в каждом варианте ИФА можно выделить следующие общие этапы:

  • получение иммуносорбента;
  • формирование многослойного комплекса на твердой фазе за счет последовательного проведения специфических реакций;
  • удаление неспецифически связавшихся компонентов, а также их избытка;
  • получение ферментного конъюгата;
  • измерение ферментативной активности специфического комплекса на твердой фазе;
  • интерпретация результатов анализа.

Каждый из этих этапов будет рассмотрен более подробно с целью выявления общих закономерностей их проведения.

Назад

ФБУН НИИ эпидемиологии
и микробиологии имени Пастера
Отдел новых технологий