Влияние величины константы равновесия на чувствительность анализа

Понятие константы равновесия легче всего рассмотреть на примере реакции одновалентного антитела с одновалентным антигеном.

Если |Ат|о - начальная концентрация антитела, |Аг|о - начальная концентрация антигена и |Ат - Аг| = |х| - концентрация специфического комплекса, то в момент равновесия, когда скорость прямой и обратной реакции равна, константа равновесия К будет определяться следующим выражением.

Рассмотрим какие количества антигена необходимы для достижения постоянного уровня насыщения антител, связанных с твердой фазой при различных значениях К. Это будет характеристикой зависимости чувствительности анализа от К. Переписав уравнение (3-2) в виде:

Умножим числитель и знаменатель на

Отношение есть отношение молярных концентраций связанных и свободных антител, обозначим его за А. Тогда уравнение (3-4) примет вид:

Для достижения постоянного уровня насыщения антител при разных значениях К будут требоваться различные начальные концентрации антигена. Пусть этот уровень составляет 50 %, т. е. А = 0,5, тогда уравнение (3-5) примет вид:

Величина сорбционной емкости белков на полистироле составляет около1,5 нг/мм2 [12]. В том случае, когда этим белком является IgG (М.м. 150000 Д) и поверхность лунки планшета, покрытая раствором IgG, составляет 0,6 см2, это соответствует поверхностной концентрации 10-7М.(1,5нгIgG соответствует = 109молекул). На 60 мм2 будет сорбировано 6х1010 молекул, при условии, что объем раствора составляет 0,1мл. В 1 л раствора содержится 6х1014 молекул, что составит 10-7М). Тогда начальная концентрация атигена, обеспечивающая одинаковое насыщение иммуносорбента составит по уравнению (3-6) 6х10-8М, 1,5х10-7 М и 10,5х10-7 М при К = 108, 107, 106 М-1 соответственно. Из этих цифр видно, что чувствительность анализа резко зависит от величины К.

Назад

ФБУН НИИ эпидемиологии
и микробиологии имени Пастера
Отдел новых технологий