Получение мономолекулярного слоя первого специфического реагента и устранение последующих взаимодействий реагент - твердая фаза

Как уже указывалось, в результате сорбции первого специфического реагента (С.Р.) происходит образование вначале мономолекулярного слоя на твердой фазе, а затем многослойной сорбции за счет белок - белковых взаимодействий [38]. Каждый процесс характеризуется своей константой равновесия, причем К1 > К2

Добавление в промывной раствор неионных детергентов типа Твин-20 позволяет осуществлять эффективную конкуренцию между белок-белковыми взаимодействиями за счет взаимодействия белок-детергент. Это же взаимодействие уменьшает сорбцию белка на твердой поверхности после частичного разрушения мономолекулярного слоя. Так как все эти процессы равновесные, то для более полного устранения многослойной сорбции необходима многократная промывка твердой фазы до 5 - 6 раз вместо 2 - 3 кратной, как обычно рекомендуют.

Для заполнения части образовавшихся свободных активных центров после этапа промывки иммуносорбента иногда проводят этап их блокирования с помощью неспецифических реагентов, таких как различные белки (бычий сывороточный альбумин, овальбумин и др.)казеин и т.д. С этой целью балластные белки в концентрации 1 - 2 % вводят в некоторых случаях в состав промывных и инкубирующих растворов на последующих стадиях анализа. Этого можно избежать, используя промывной раствор, в котором наряду с детергентами содержатся хаотропные ионы типа Сl- в высокой концентрации (0,01 М Nа-фосфатный буфер, рН = 7,2 - 7,4, содержащий 0,05 % твина и 0,65 М NaCl).

Назад

ФБУН НИИ эпидемиологии
и микробиологии имени Пастера
Отдел новых технологий