Эффект иммобилизации конъюгата на иммуносорбенте

В твердофазном ИФА конъюгат проявляет свою ферментативную активность, будучи иммобилизованным на твердой фазе. Это приводит к появлению ряда особенностей по сравнению с ферментативными реакциями, протекающими в растворе [4].

Основное отличие заключается в появлении диффузионных ограничений. Высокая каталитическая активность конъюгата приводит к изменению концентраций субстрата и продукта в его микроокружении, в результате чего возникают градиенты концентраций субстрата и продукта между раствором и твердой фазой с иммобилизованным конъюгатом. Другой причиной возникновения таких градиентов является наличие возле твердой фазы неперемешиваемого слоя раствора, так называемого слоя Нернста. Эти ограничения диффузии накладывают особенности на процесс ингибирования ферментативной реакции субстратом или продуктом, что может приводить при изменении концентрации субстрата к резким переходам реакции из кинетического режима в диффузионный и наоборот.

Второй отличительной особенностью в поведении иммобилизованных конъюгатов является изменение рН-зависимости фермента. Характер изменения ферментативной активности от рН хорошо изучен для большинства ферментов, находящихся в разбавленных растворах. Однако, эта зависимость может резко измениться, если фермент находится в гетерогенной среде. Причиной таких изменений служит перераспределение протонов между фазой свободного раствора и микроокружением фермента в силу рассмотренных диффузионных ограничений.

Поэтому интенсивность перемешивания раствора вокруг твердой фазы, как на этой стадии, так и на других рассмотренных стадия ИФА, играет весьма важную роль.

Назад

ФБУН НИИ эпидемиологии
и микробиологии имени Пастера
Отдел новых технологий