Хемилюминисцентные субстраты

Наиболее широко применяемыми хемилюминисцентными субстратами являются люминол и изолюминол. На стадии измерения ферментативной активности имеет место реакция их окисления перекисью водорода в присутствии пероксидазных конъюгатов.

Для этой реакции, оптимальные параметры которой изучены в работе [52], характерно сначала быстрое возрастание интенсивности хемилюминисценции после смешиваний реагентов (растворов перекиси водорода и люминола), прохождение через максимум, а затем быстрый спад.

Излучение света в результате люминол - пероксидазной реакции может быть усилено в несколько сот раз за счет использования усилителей хемилюминисценции, которыми являются 6-гидроксибензотиазол, п-иодфенол, п-фенилфенол, 1-бром-2-нафтол и др.[53]. Этот подход обеспечивает значительное усиление хемилюминисценции и соответствующее повышение чувствительности анализа [54]. Кроме того, имеет место и другое практически важное преимущество. В результате добавления усилителей интенсивность хемилюминисценции остается постоянной в течение примерно 20 минут. Это приводит к большей стандартизации результатов и позволяет проводить учет результатов уже через 30 секунд после добавления раствора субстрата [55].

Таблица 1. Ферменты и субстраты, используемые в хромофорном ИФА.

*Образуют нерастворимые окрашенные соединения.

Таблица 2. Ферменты и субстраты, используемые во флуоресцентном ИФА.

Таблица 3. Чувствительность ИФА при использовании хромофорных и флуорохромных субстратов.

Примечание:
фл. - флуоресцентный ИФА,
хр. - хромофорный ИФА.

Назад

ФБУН НИИ эпидемиологии
и микробиологии имени Пастера
Отдел новых технологий