Специфичность и чувствительность ИФА

Под чувствительностью понимается та минимальная концентрация определяемого реагента, при которой заметно различие в величине сигнала этой концентрации и образца, заведомо не содержащего определяемого реагента ( отрицательный контроль). Эта разница в величине сигналов должна составлять 2 - 3 величины стандартного отклонения (СО) для отрицательного контроля.

Для качественной диагностики, когда важно наличие или отсутствие антител в исследуемой пробе используют положительно-отрицательный метод. Положительным значением (+) считают величину сигнала, которая в 2 - 3 раза превышает сигнал от контрольного образца, не содержащего определяемые антитела (-). Процент положительных проб представляет собой выявляемость метода.

Также на чувствительность влияет ферментативная активность коньюгата. Наряду с ферментативной активностью конъюгата большое влияние на чувствительность анализа оказывает тип используемого субстрата. Продукт ферментативного превращения субстрата должен обладать новым физико-химическим параметром, позволяющим детектировать его с высокой чувствительностью. Такими параметрами являются: поглощение света в видимой области (хромофорные субстраты), флуоресценция в видимой области (флуоресцентные субстраты) и хемилюминисценция (хемилюминисцентные субстраты).

Высокая чувствительность ИФА достигается также благодаря использованию различных физических методов регистрации ферментативной активности: фотометрических, флуориметрических, био- и хемилюминесцентных. Как всякий аналитический метод, ИФА имеет свои ограничения, связанные с биологической природой молекул детектора (антитела) и усилителя (фермента). Применение ИФА в диагностических целях требует изучения причин неспецифических реакций и их устранения. Как высокочувствительный метод ИФА чрезвычайно зависит от качества реагентов и техники проведения исследования.

Назад

ФБУН НИИ эпидемиологии
и микробиологии имени Пастера
Отдел новых технологий