Методы диффузии

Диффузия с диска

Это качественный метод. Методики этого типа основаны на диффузии антибиотика из центральной диффузной зоны, чаще с бумажного диска, в среду, приготовленную на агаре, с посевом растущих микроорганизмов. Концентрация антибактериального препарата постепенно падает на пути от середины диска к периферии. Зона подавления роста микроорганизмов регистрируется в конце периода роста. Её можно сравнить с зонами, полученными при посеве "чувствительных" эталонных микроорганизмов, выращиваемых в аналогичных условиях.

Для образования зоны подавления роста бактерий требуется, чтобы в среде была создана критическая концентрация антибиотика, которая была бы достаточна, чтобы сдерживать рост на более низком уровне, чем критическая плотность клеток, при которой можно определить рост визуально. Когда концентрация антибиотика в среде падает ниже критической точки, происходит размножение клеток и образуется зона роста. При определении в одинаковых условиях существует тесная связь между критической концентрацией и МПК для каждой линии микроорганизмов.

Скорость диффузии определяется главным образом размерами, полярностью, растворимостью в липидах и способностью к хелатообразованию молекулы антибиотика, а также температурой инкубирования, градиентом концентрации, толщиной слоя, рН, ионной силой и другими характеристиками питательной среды. Скорость роста зависит от вида микроорганизма, температуры инкубирования культуры, атмосферы, в которой происходит рост, рН, начальной концентрации инокула, характера питательной среды, наличия антагонистов антибиотика и т. д.

Инокуляция

Количество инокулята существенным образом влияет на время, необходимое для достижения критической плотности бактерий, особенно для тех микроорганизмов, у которых механизм резистентности зависит от масштаба популяции. Посевы могут быть осуществлены путем заливки раствора с микроорганизмами на поверхность питательной среды (метод Эрикксона) либо путем инокуляции тампоном (метод Кирби- Бауэра), либо путем наслаивания на агар (метод Кирби-Бауэра, модификация Barry). В качестве инокулята в большинстве случаев используют сливной или полусливной рост посева микроорганизмов [1,8,29,30,34].

Назад

ФБУН НИИ эпидемиологии
и микробиологии имени Пастера
Отдел новых технологий