Методы разведения

Методы разведения применяются для определения МПК, они могут быть использованы и для определения минимальных бактерицидных концентраций (МБК) антибиотиков. Их можно выполнять как на бульоне, так и на агаровых средах. Бульон чаще используется для определения МБК.

Методы разведения основаны на использовании возрастающих в два раза или уменьшающихся в два раза концентраций как в бульоне, так и на агаровой среде. Т.е эти методы основаны на использовании постоянного градиента концентрации.

Эти методы точнее, чем диффузионные, при которых концентрация антибиотика в среде изменяется. Самая низкая концентрация, задерживающая видимый рост микроорганизмов, обозначается как МПК. На бульоне эта конечная степень разведения более отчетливо выявляется, чем на агаровых средах. Однако агаровые среды позволяют выявить количество резистентных или частично устойчивых бактерий в инокуляте.

Основными достоинствами методов разведения является менее выраженное влияние скорости роста микроорганизмов и количества инокулята на результаты исследований и возможность определения бактерицидных концентраций и более четкое выявление конечного этапа роста.

Как правило, используют инокулят, содержащий 104 - 105 бактерий на 1 мл. Состав питательной, среды и условия инкубирования, как и при работе с диффузионными методами, могут повышать активность или снижать активность антибактериальных средств при использовании методов разведения.

МБК получают путем нанесения бульонной культуры из пробирок, в которых четко фиксируется ингибирование роста бактерий, на чашки со средой, не содержащей антибиотика. Те пробирки, в культуре из которых вырастает менее 0,1 % бактерий, принимают за соответствующие МБК. Определение МБК на агаровых разведениях гораздо сложнее и производится с использованием отпечатков на чашках, или путем нанесения соскоба на чашку с питательной средой без антибиотика, сделанного бактериологической петлей с зоны инокуляции.

Использование агаровых разведений МПК обладает преимуществом, позволяющим одновременно исследовать много линий микроорганизмов, применяя многократные инокуляции.

В последние годы определение МПК стало доступным для обычных лабораторий, так как были разработаны микрометоды и фирменные микротитраты разведений антибиотиков, получены агар с содержанием критических концентраций препаратов и обезвоженные антибиотики на бумажных дисках или пластинах [1,8,29,33,34].

Назад

ФБУН НИИ эпидемиологии
и микробиологии имени Пастера
Отдел новых технологий