Применение метода мультиплексной ПЦР-РВ для дифференциальной диагностики кишечных вирусных инфекций

Схожесть симптомов кишечных вирусных заболеваний не позволяет по клиническим признакам определить этиологию инфекции. В нашей стране в эпидемиологических лабораториях широкое применение получили традиционные методы идентификации вирусов: иммунохимические, серологические и культуральные. Эти методы имеют недостатки, связанные с невысокой чувствительностью (иммунохимические и серологические), длительностью, трудоемкостью простановки анализов (культуральный метод). Кроме того, некоторые кишечные вирусы не размножаются в культуре клеток (калицивирусы и вирус гепатита Е) или с трудом поддаются культивированию (вирус гепатита А, ротавирусы, астровирусы). Решение этих проблем в последние годы связывают с развитием молекулярно-биологических лабораторных методов, таких как различные модификации полимеразной цепной реакции (ПЦР), в том числе ПЦР с детекцией в режиме реального времени (ПЦР-РВ). Достоинствами метода ПЦР-РВ являются высокая специфичность, чувствительность, универсальность процедуры, простота и удобство проведения анализа, автоматизация процессов, возможность выявления сразу нескольких патогенов в одной пробирке при условии наличия в реакционной смеси соответствующих праймеров и зондов (мультиплексная ПЦР-РВ).

Цель работы – оценить эффективность метода мультиплексной обратной транскрипции (ОТ) и полимеразнй цепной реакции с флуоресцентной детекцией в режиме реального времени для дифференциального выявления в различных биологических образцах 11 групп кишечных вирусов: аденовирусов, энтеровирусов, полиовирусов, вирусов гепатитов А и Е, ротавирусов групп А и С, ортореовирусов, норовирусов, саповирусов и астровирусов.

Для оценки чувствительности выявления кишечных вирусов использовали панели изолятов вирусов и клинических образцов, охарактеризованные референтными методами. Из исследуемых образцов выделяли нуклеиновые кислоты и проводили мультиплексную реакцию ОТ и ПЦР-РВ.

Чувствительность лабораторного набора реагентов (ЛНР) при сравнении с результатами референтных методов составила 100% для ротавируса А, аденовирусов, энтеровирусов и норовирусов, 88,9% для вируса гепатита Е и 92,3% для вируса гепатита А, а диагностическая специфичность – 99,4%. При анализе 697 клинических образцов от больных с симптомами острой кишечной инфекции нуклеиновые кислоты различных кишечных вирусов были выявлены в 71,7%.

Показано, что метод мультиплексной ОТ ПЦР-РВ является эффективным методом этиологической диагностики кишечных вирусных инфекций. Было продемонстрировано, что с помощью ЛНР этиологию кишечных заболеваний можно установить в 63-72%, а у детей с водянистой диареей – примерно в 90% случаев. (См. статью: Марова А.А. с соавт. “Применение метода мультиплексной ПЦР-РВ для дифференциальной диагностики кишечных вирусных инфекций”).
"Журн. микробиол.", 2012, № 6, с. 39 - 45.

Все новости

ФБУН НИИ эпидемиологии
и микробиологии имени Пастера
Отдел новых технологий