Способ получения антигена молекулярной массой 45кДа из Mycobacterium tuberculosis

Серологические методы наиболее удобны для диагностики инфекционных болезней, так как для анализа используется легко доступный клинический материал: сыворотка или плазма крови человека. Однако эти методы, включая метод ИФА, не обладают достаточной чувствительностью для диагностики туберкулеза.

Цель. Получение антигенного препарата из Mycobacterium tuberculosis, который отличался бы высокой активностью и специфичностью.

В работе использовали штамм Mycobacterium tuberculosis ("Академия"). Антигенный препараты из Mycobacterium tuberculosis получали обработкой бактериальных клеток диметилсульфоксидом с последующей дезинтеграцией стеклянными шариками в гемогенизаторе. Белковые фракции исходного, промежуточного и конечного препаратов выявляли с помощью электрофореза в полиакриламидном геле по Леммли. Серологическую активность полученного препарата изучали в иммуноблотинге с 24 сыворотками пациентов больных туберкулезом легких. На всех иммуноблотах весьма четко выявлялась одна серопозитивная фракция с молекулярной массой в 45 кДа. Следует отметить, что в этом эксперименте использовали произвольно взятые сыворотки пациентов больных легочной формой туберкулеза. Данный результат предполагает, что на полученном антигене проявляется 100 % чувствительность, что вызывает определенные сомнения. По литературным данным известно, что 100 % противотуберкулезные антитела (ПТАТ) выявляются только при фиброзно-кавернозном туберкулезе и при бактериовыделении.

Таким образом, описан метод получения из клеток M. tuberculosis антигенного препарата с молекулярной массой 45 кДа, обладающей серологической активностью с сыворотками больных с установленным диагнозом туберкулеза в реакциях иммуноблоттинг. Полученный антигенный препарат содержит менее 5 % балластных белков. Предположительно этот антиген представляет собой гликопротеин, локализованный на поверхности бактериальной клетки. Данное предположение основывается на щадящем приеме обработки бактериальных клеток (10 % водный раствор-ДМСО) и на сходстве молекулярных масс 45–47 кДа антигенного комплекса. (См. Элдер А. Способ получения антигена молекулярной массой 45кДа из Mycobacterium tuberculosis // А. Элдер, В. И. Вершинина, К .С. Хаертынов и др / Журнал Фундаментальные исследования. - 2013. - № 1-1. - С.18-22.).

Все новости

ФБУН НИИ эпидемиологии
и микробиологии имени Пастера
Отдел новых технологий