Получение рекомбинантного белка CRM197

Дифтерийный токсин (DTx, 58 kDa) является белковым токсином, который вызывает одноименное заболевание. Проникая в клетки, дифтерийный токсин приводит к нарушению синтеза белка и гибели клеток за счет ферментативной активности.

В начале 1970-х гг. были выделены нетоксичные или малотоксичные «кросс-реактивные» формы дифтерийного токсина – cross-reacting materials – CRMs. CRM30 и CRM45 утратили некоторые структурные элементы и имеют меньшую молекулярную массу по сравнению с дифтерийным токсином; они сохранили ферментативную активность in vitro, но лишились связывающей способности и способности к проникновению внутрь клетки, чем и обуславливается потеря ими токсичности. CRM176, CRM228 имеют ту же молекулярную массу, что и дифтерийный токсин дикого типа, но утратили и ферментативную активность, и связывающую.

Белок CRM197 утратил ферментативную активность, но не потерял связывающую, он является наиболее подходящим для использования в составе вакцин и терапевтических препаратов.

Классическим способом получения дифтерийного токсина и его нетоксичных производных является продукция в клетках Corynebacterium diphtheriae. Преимущество использования E. coli в качестве продуцента состоит в том, что данный метод является более простым и дешевым и позволяет получать рекомбинантный CRM197 в короткие сроки с использованием непатогенного микроорганизма.

Целью исследования являлось создание адъюванта, который, наряду с высокой эффективностью, обладал бы относительной безопасностью применения. В данной работе использовался запатентованный высокопродуктивный штамм-продуцент рекомбинантного CRM197 на основе клеток E. coli. В ходе исследования подобран оптимальный протокол индукции экспрессии гена crm197, разработан метод получения высокоочищенного препарата рекомбинантного CRM197 путем последовательного применения ионообменной, гидрофобной и молекулярноситовой типов хроматографии.

Получение CRM197 с использованием разработанного авторами высокопродуктивного штамма-продуцента на основе клеток E. coli, а также трехступенчатой очистки является конкурентоспособным вариантом и может быть внедрено в производственную практику.

(Cм. Духовлинов И.В. с соавт. Получение рекомбинантного белка CRM197 в клетках E. coli / Инфекция и иммунитет. – 2015. – N 1. - С. 37 - 44).

Все новости

ФБУН НИИ эпидемиологии
и микробиологии имени Пастера
Отдел новых технологий