Применение ПЦР для диагностики инфекционного менингита

Этиологическая диагностика менингита, особенно в случае бактериальных инфекций, затруднена низкой чувствительностью культуральных методов, поскольку при подозрении на бактериальную инфекцию мозговых оболочек немедленно назначаются антибиотики широкого спектра. Ослабленный в результате антибиотикотерапии патоген не всегда удаётся выделить в культуру. Вирусологическое исследование при менингитах также обладает низкой чувствительностью и проводится в редких случаях. Может ли ПЦР дать дополнительную информацию об этиологии менингита?

Предложенный способ идентификации этиологических агентов менингита включает две реакции ПЦР в реальном времени, проводящиеся в мультиплексном режиме, первая из которых предназначена для выявления бактериальных патогенов S. pneumoniae, N. meningitidis и H. influenzae, а вторая – энтеровирусов, вирусов паротита и простого герпеса. Перед применением для исследования клинического материала тест-системы прошли оценку чувствительности. Система для выявления бактерий позволяла установить присутствие 2 копий целевой последовательности S. pneumoniae и 1 копии H. influenzae и N. meningitidis на аликвоту. Система для выявления вирусов давала положительный результат при наличии в аликвоте 2 целевых последовательностей вирусов простого герпеса или паротита, и 3 – энтеровируса.

Системы были использованы для ретроспективного исследования 292 образцов ликвора по 400 мкл от детей с подозрением на менингит различной этиологии, в 12 (4,1 %) случаях были выявлены ДНК бактерий, в 94 (32 %) – ДНК вирусов. Бактериальную культуру удалось выделить только в 4 случаях, в 3 случаях был выделен S. pneumoniae и в одном – H. influenzae. Таким образом, 4 случая были идентифицированы как случаи бактериального менингита на основании культурального метода, ещё 4 – на основании микроскопического исследования (окраска по Граму) и 2 – на основании выделения патогена из крови и изменений клеточного состава спинномозговой жидкости.

В ПЦР было подтверждено шесть из этих случаев: все случаи, когда патоген был выделен в культуру и два случая, в которых патоген был выявлен при микроскопическом исследовании. В одном из случаев, когда при микроскопии в мазке присутствовали бактерии, а при ПЦР ДНК бактерий обнаружено не было, но результат ПЦР показал наличие вирусной инфекции. В 6 случаях, когда ПЦР показала присутствие патогенных бактерий в ликворе, микробиологическое и микроскопическое исследования не показали присутствия патогена.

Выделить вирусный возбудитель из спинномозговой жидкости удалось только в одном случае. При этом повышенная клеточность ликвора отмечалась, преимущественно, при наличии инфекционных агентов по результатам ПЦР, в то время как повышенное содержание белка отмечалось только в образцах, где на основании ПЦР было установлено присутствие бактериальных патогенов.

Из 292 детей 90 (30,8 %) были выписаны с диагнозом «бактериальный менингит» и 97 (33,2 %) – с диагнозом «вирусный менингит». 50 % пациентов, которым на основании симптоматики был поставлен диагноз «бактериальный менингит», имели ДНК вирусов в ликворе на основании ПЦР. Возможно, наличие данных о природе возбудителя помогло бы повысить эффективность лечения этих пациентов.

применение ПЦР для диагностики инфекционного менингита

Khumalo J, Nicol M, Hardie D, Muloiwa R, Mteshana P, Bamford C. Diagnostic accuracy of two multiplex real-time polymerase chain reaction assays for the diagnosis of meningitis in children in a resource-limited setting. PLoS One. 2017 Mar 27;12(3):e0173948.

Все новости

ФБУН НИИ эпидемиологии
и микробиологии имени Пастера
Отдел новых технологий