Гепатит С

Основным методом первичной диагностики вирусного гепатита С является выявление антител к вирусным белкам с помощью иммуноферментного анализа (ИФА). Однако одного этого теста недостаточно, поскольку специфические антитела не выявляются на ранних стадиях после инфицирования вирусом (фаза серонегативного окна продолжительностью до нескольких месяцев), а также при иммунодефицитных состояниях. Прецизионная детекция вируса гепатита С (ВГС) и мониторинг подтвержденного заболевания требуют определения прямых маркеров ВГС: РНК и вирусспецифических белков. Метод полимеразной цепной реакции (ПЦР) для выявления РНК ВГС в плазме крови обладает высокой чувствительностью, однако его применение в практическом здравоохранении ограничено высокой стоимостью.

В последние годы активно разрабатываются иммуноферментные методы выявления белка нуклеокапсида (core-белок) ВГС в сыворотке крови, способные служить определенной альтернативой ПЦР. За рубежом предложено несколько коммерческих тест-систем для детекции core-белка ВГС в сыворотке крови, однако в нашей стране они дороги и малодоступны. Отечественные тест-системы для выявления core-белка ВГС отсутствуют. Цель исследования состояла в разработке и лабораторной апробации чувствительного и специфичного метода выявления прямого маркера ВГС – core-белка – в сыворотке крови. Эксперименты проводили с образцами плазмы и сыворотки крови бессимптомных ВГС-инфицированных доноров (n=65), больных острым и хроническим гепатитом С (n=295), а также ВГС-негативных доноров (n=20). Протокол обработки сывороток включал их концентрацию с помощью полиэтиленгликоля и последующие обработки осадков для выявления core-белка в составе вирионов, безоболочечных нуклеокапсидов и иммунных комплексов. В результате был разработан метод количественного обнаружения core-белка с помощью сэндвич-варианта иммуноферментного анализа.

Включение в состав сэндвича комбинации трех оригинальных моноклональных антител позволило обнаруживать в образцах core-белок по крайней мере 3 генотипов ВГС (1, 2, 3) с чувствительностью 20 пг/мл у большинства ВГС-инфицированных доноров. Результаты определения core-белка и РНК ВГС коррелировали с высокой степенью достоверности. Показано, что для обнаружения ВГС в крови больных острым гепатитом С достаточно выявлять свободно циркулирующие вирионы, тогда как при хроническом гепатите С для достижения большей чувствительности следует включать анализ иммунных комплексов. Полученные результаты являются основой для разработки тест-системы для диагностики гепатита С, в том числе на ранних стадиях, до сероконверсии, а также для определения вирусной нагрузки при интерферонотерапии. Внедрение метода в практику позволит увеличить надежность диагностики гепатита С и безопасность гемотрансфузий. (См. статью: Масалова О.В. с соавт. "Сравнительный анализ core-белка вируса гепатита С в образцах плазмы и сыворотки крови ВГС-инфицированных доноров и больных гепатитом С"). "Вопр. вирусол.", 2007, № 4, с. 11 - 17.

Все новости

ФБУН НИИ эпидемиологии
и микробиологии имени Пастера
Отдел новых технологий