Питательная среда для ускоренной идентификации Escherichia coli и других колиформных бактерий

Санитарно-микробиологические исследования объектов внешней среды осуществляются в соответствии с МУК 4.2.1018-01 и 4.2.577-96, которые предусматривают определение в исследуемом материале условно патогенных энтеробактерий (УПЭ) – E.coli, Citrobacter, Enterobacter, Klebsiella и Serratia (колиформные бактерии). Однако в виду схожести биохимических характеристик УПЭ (расщепление лактозы) дифференцировать их друг от друга затруднительно. А в случае присутствия в микробной ассоциации протея выделение чистой культуры становится невозможным в виду роения протея на традиционных средах Эндо и Левина.

Регламентируемые схемы выделения и идентификации E.coli и других колиформных бактерий громоздки, трудоемки и требуют значительных затрат времени – от 3 до 5 суток.

В то же время, известно, что в семействе энтеробактерий более 97% всех штаммов E.coli обладают способностью продуцировать фермент β-глюкуронидазу, что является отличительным свойством этого штамма, в то время, как остальные бактерии группы кишечной палочки, в том числе и E.coli, обладают ферментом β-галактозидазой. Идентификация возбудителя посредством выявления его видоспецифических внутриклеточных ферментов с помощью хромогенных индикаторов позволяет значительно сократить время на проведение анализа. Хромогенные сухие питательные среды со второй половины прошлого века выпускаются зарубежными фирмами. В нашей стране такие среды не производят.

Цель исследования – разработка отечественной, питательной среды E.coli-Coliform-хром-агара для ускоренной идентификации кишечной палочки и других колиформных бактерий.

В работе использовали сухой питательный бульон и казеиновый панкреатический гидролизат производства НПО "Питательные среды", сухие желчные соли фирмы "Oxoid", агар микробиологический, фосфатный буфер, хромогенные индикаторы фирмы "Sigma" β-D-галактопиранозид и β-D-глюкуронид. Качество образцов среды определяли в соответствии с общепринятыми методами.

В качестве сред сравнения использовали среду Эндо по ФС-42-3877-99 и Hi Crome ECC Agar фирмы "Fluka".

В результате выполненных экспериментальных исследований разработан оптимальный состав рецептуры хромогенной питательной среды, обеспечивающий рост всех тест-штаммов через 18-24 часа при посеве на чашки 100 м.к., при этом все лактозоположительные тест-штаммы, трудно отличимые друг от друга на средах Эндо и Левина, легко дифференцируются визуально на предлагаемой среде по цвету колоний: E.coli - сине-зеленого цвета, колиформные бактерии (Citrobacter, Enterobacter, Klebsiella, Serratia) – желтого цвета, остальные тест-штаммы – бесцветные, рост стафилококков отсутствует. В отличие от сред сравнения предлагаемая среда полностью подавляет роение протея и не требует предварительной стерилизации перед употреблением, что значительно упрощает работу с ней. В связи с тем, что через 18-24 часа инкубации тест-штаммов осуществляется четкая их идентификация по глюкуронидазной и галактозидазной активности, постановка дополнительных идентификационных тестов (ТИМАЦ), предусмотренных действующими МУК, не требуется, что сокращает втрое сроки идентификации возбудителя.(См. статью: Меджидов М.М. с соавт. "Разработка питательной среды для ускоренной идентификации Escherichia coli и других колиформных бактерий в объектах окружающей среды"). "Журн. микробиол.", 2007, № 4, с. 114 - 115.

Все новости

ФБУН НИИ эпидемиологии
и микробиологии имени Пастера
Отдел новых технологий