Разработка экспериментальной тест-системы на основе иммуночипа для серодиагностики сифилиса

Совершенствование диагностики сифилиса по-прежнему актуально. Широко используется в качестве подтверждающего теста при диагностике инфекционных заболеваний, в том числе и при ранней, дифференциальной и ретроспективной диагностике сифилиса иммуноблоттинг. Данный метод обладает высокой чувствительностью и специфичностью, позволяя проводить анализ спектра антител в динамике. В то же время, метод имеет ряд ограничений, прежде всего длительное время анализа, высокую стоимость исследования, низкую производительность из-за отсутствия специализированного оборудования. В связи с этим, актуально создание тест-систем нового поколения, обладающих всеми преимуществами иммуноблоттинга и обеспечивающих высокую производительность анализа.

В последнее десятилетие существенное развитие получила технология анализа сложных биологических систем с помощью так называемых биочипов. При конструировании биочипов сочетаются принцип миниатюризации и многофакторного анализа. Принцип миниатюризации, реализованный в биочипах, приводит к снижению себестоимости анализа и повышению производительности исследования.

Цель работы – разработка тест-системы на основе иммуночипа для выявления иммуноглобулинов класса G к Treponema pallidum. Рекомбинантные антигены T.pallidum Tp47, Tp17, Tp15, TmpA были раздельно иммобилизованы на активированные слайды в виде индивидуальных спотов (пятен). Для выявления специфических антител к возбудителю сифилиса в сыворотке крови человека проводили непрямой иммунофлуоресцентный анализ на иммуночипе с помощью антивидовых антител к IgG человека. Результаты тестирования сывороток считывали с помощью флуоресцентного сканера. Для каждого антигена рассчитывали критический уровень сигнала флуоресценции и коэффициент позитивности. Оценку чувствительности и специфичности иммуночипа проводили на клиническом материале из 400 образцов сывороток крови, содержащих и не содержащих антитела к T.pallidum.

Из 200 положительных образцов сывороток крови 5 были интерпретированы как неопределенные, так как в иммуночипе регистрировали позитивные значения только по антигену Тр17, что было сопоставимо с результатами в иммуноблоттинге. Для остальных 195 сывороток крови получен положительный спектр антител к двум и более антигенам. Специфичность тест-системы на основе иммуночипа составила 100%.

Разработана экспериментальная тест-система для дифференциальной серологической диагностики сифилиса на основе иммуночипа. По чувствительности и специфичности данная тест-система сопоставима с тест-системами на основе ИФА. (См. статью: Смердова М.А. с соавт. “Разработка экспериментальной тест-системы на основе иммуночипа для серодиагностики сифилиса”).

"Журн. микробиол.", 2008, № 6, с. 54 - 58.

Все новости

ФБУН НИИ эпидемиологии
и микробиологии имени Пастера
Отдел новых технологий