Выявление и идентификация респираторных вирусов методом мультиплексной ПЦР с детекцией в режиме реального времени

Основной вклад в структуру острых респираторных вирусных инфекций (ОРВИ) вносят вирусы гриппа, парагриппа, респираторно-синцитиальный вирус, коронавирусы, аденовирусы, риновирусы и некоторые энтеровирусы. С точностью идентифицировать респираторные вирусные инфекции можно только при помощи лабораторных методов диагностики. Затруднения при дифференциальной лабораторной диагностике этих инфекций вынуждают вести статистический учет по сумме всех случаев, включая их в комплекс ОРВИ. Выделение вируса в культуре клеток и реакция нейтрализации типоспецифическими сыворотками, считающиеся «золотым стандартом» диагностики, в то же время обладают рядом недостатков, включающих высокую трудоемкость и продолжительность теста. Широкое распространение имеют иммунохимические экспресс-методы выявления вирусных агентов в клинических образцах. Основными их преимуществами являются доступность и простота постановки. Однако, в ряде случаев, они бывают недостаточно информативны и неприменимы в отношении риновирусов и других респираторных вирусов, характеризующихся высоким антигенным разнообразием. В настоящее время для выявления и идентификации респираторных вирусов широко используют молекулярные методы, специфичность которых основана на уникальности нуклеотидных последовательностей вирусных геномов.

Подобраны нуклеотидные последовательности праймеров и зондов TaqMan для выявления десяти групп респираторных вирусов в биологических образцах (вирусов гриппа А и В, вирусов парагриппа 1, 2, 3, 4 типов, аденовирусов, респираторно-синцитиального вируса, риновирусов и энтеровирусов) и показана их специфичность на лабораторных штаммах респираторных вирусов. На основе подобранных праймеров и зондов разработана мультиплексная ПЦР-тест-система с флуоресцентной детекцией в режиме реального времени для одновременного выявления в клинических образцах десяти основных возбудителей ОРВИ.

На основе анализа 226 клинических образцов от больных с симптомами ОРВИ было показано, что разработанная мультиплексная ПЦР-тест-система не уступает по специфичности аналогичной тест-системе, которая применяется для диагностики ОРВИ в Медицинском центре Лейденского Университета (Нидерланды).

При анализе клинических образцов была установлена этиологическая структура ОРВИ у группы пациентов в ряде лечебно-профилактических учреждений г. Москвы и Московской области в период с октября 2007 г. по май 2008 г. Различные респираторные вирусы были выявлены в 122 образцах, что составляет 54% от всех исследованных образцов. Разработан алгоритм для количественного определения нуклеиновых кислот респираторно-синцитиального вируса, аденовирусов, вирусов гриппа А и В в биологических образцах. (См. диссертацию ”Выявление и идентификация респираторных вирусов методом мультиплексной ПЦР с детекцией в режиме реального времени”).

Никонова А.А. Автореф. дис. канд. биол. наук. М., 2008.

Все новости

ФБУН НИИ эпидемиологии
и микробиологии имени Пастера
Отдел новых технологий