Практическое значение тест-системы «ТБ-Биочип MDR» в экспресс-идентификациии штаммов M.tuberculosis с множественной лекарственной устойчивостью

Устойчивость микобактерий туберкулеза (МБТ) к лекарственным препаратам обусловлена в основном высокой степенью гидрофобности клеточной оболочки, действующей как барьер проницаемости, но многие потенциальные факторы устойчивости закодированы также и в геноме. Известны гены МБТ, ответственные за формирование лекарственной устойчивости к изониазиду (katG, inhA, ahpC), рифампицину (rpoB), стрептомицину (rrs и rpsL), этамбутолу (embB), пиразинамиду (pncA), фторхинолону (gyrA).

Одним из методов, выявляющих лекарственную устойчивость МБТ к рифампицину и изониазиду по мутациям в генах rpoB, katG, inhA, ahpC является тест-система «ТБ-Биочип MDR», разработанная в Институте молекулярной биологии имени В.А.Энгельгардта РАН (Москва, Россия).

Цель работы – оценить значение тест-системы «ТБ-Биочип MDR» в экспресс-идентификации штаммов M.tuberculosis с лекарственной устойчивостью к рифампицину и изониазиду.

Обследовали 445 впервые выявленных больных легочной формой туберкулеза, находившихся на стационарном лечении. Всем пациентам проводили клиническое и рентгенологическое исследования. Все пациенты являлись бактериовыделителями (по методу микроскопии мазка мокроты). Образцы мокроты для исследования собирали по общепринятым методикам в 1-й день поступления больных в стационар Национального центра фтизиатрии.

Во всех случаях чувствительность МБТ к противотуберкулезным препаратам определяли бактериологическим методом абсолютных концентраций и тест-системой «ТБ-Биочип MDR».

Исследование на биочипах заключалось в выделении ДНК МБТ из мокроты, проведении двух последовательных мультиплексных полимеразных цепных реакций (ПЦР) со специфическими для IS6110, rpoB, katG, inhA и ahpC праймерами, гибридизации продуктов амплификации второй стадии ПЦР с олигонуклеотидными зондами, установленными в ячейках биочипа. Результаты гибридизации регистрировали на портативном анализаторе биочипов Чипдетектор-03 (ООО «Биочип-ИМБ», Россия) с соответствующим программным обеспечением Imageware. Сопоставляя полученный флуоресцентный образец со схемой расположения олигонуклеотидов на микрочипе, определяли мутации, присутствующие в изучаемой последовательности ДНК, и делали заключение об устойчивости или чувствительности исследуемого образца к рифампицину или к изониазиду.

Основным преимуществом тест-системы «ТБ-Биочип MDR» в отличие бактериологического метода является возможность выявить штаммы МБТ с множественной лекарственной устойчивостью в течение двух дней, что дает возможность с самого начала лечения больного подобрать адекватную схему химиотерапии. Тест-система «ТБ-Биочип MDR» позволяет также определить типы мутаций в генах rpoB, katG, inhA, ahpC, обусловливающих устойчивость МБТ к рифампицину и изониазиду и решить проблему быстрого подбора наиболее эффективных комбинаций противотуберкулезных препаратов. (См. статью: Исакова Ж.Т. “Практическое значение тест-системы «ТБ-Биочип MDR» в экспресс-идентификациии штаммов M.tuberculosis с множественной лекарственной устойчивостью”).

"Клин. лаб. диагностика", 2009, № 2, с. 50 - 51.

Все новости

ФБУН НИИ эпидемиологии
и микробиологии имени Пастера
Отдел новых технологий