Разработка диагностической тест-системы на основе
сэндвич-ИФА для выявления вируса гриппа А птиц

Впервые зафиксированный в 1997 г. случай заражения 3-летнего ребенка из Гонконга вирусом гриппа А птиц (подтип Н5N1) явился реальным доказательством потенциальной опасности вируса гриппа птиц (ВГП) для человека. К настоящему времени накоплено достаточно много документально подтвержденных данных об инфицировании людей ВГП, свидетельствующих о том, что вирус преодолел межвидовой барьер от птиц к человеку и активно эволюционирует, становясь более вирулентным.

Кроме того, при возникновении эпизоотии грипп наносит существенный экономический ущерб птицеводству и животноводству.

Случаи переноса ВГП в популяцию свиней были отмечены в 1970 г., 1996 г. и 2004 г. Поскольку свиньи инфицируются как ВГП, так и вирусом гриппа человека, существует реальная возможность возникновения новых вариантов ВГП, опасных для людей. ВГП, циркулирующий в природе среди диких птиц, может стать высокопатогенным для домашней птицы. Все это делает ситуацию с распространением вируса практически неконтролируемой.

В контексте вышесказанного большое значение имеют быстрые, доступные и надежные методы диагностики ВГП, к которым можно отнести различные варианты иммуноферментного анализа (ИФА). Согласно данным литературы, для обнаружения антител ко всем 16 подтипам ВГП оптимально использование нуклеокапсидного белка (NP), одного из наиболее консервативных антигенов вируса гриппа.

Целью данной работы являлась разработка "сэндвич"-ИФА на основе моноклональных антител (МКА) к NP, позволяющего в течение нескольких часов определить наличие вируса гриппа А птиц в вируссодержащих препаратах и биологическом материале.

Получена панель гибридом, продуцирующих МКА к NP вируса гриппа А птиц. На основе 2 МКА разработан антигенсвязывающий ИФА ("сэндвич"-ИФА), в котором МКА NP3 были использованы в качестве антигенсвязывающих антител, а МКА NPS, конъюгированные с пероксидазой хрена, - как антигендетектирующие антитела. Определена специфичность тест-системы к вирусу гриппа птиц. Установлено, что разработанная тест-система специфично выявляет вирус гриппа А всех исследованных подтипов и не дает перекрестных реакций с другими протестированными вирусными патогенами. Чувствительность "сэндвич"-ИФА составила 30 нг/мл NP в препаратах вируса, обработанных мочевиной. Метод апробирован на экспериментально H5N1-инфицированных мышах. Полученные данные положительно коррелировали с результатами патологоанатомических исследований и методом изоляции вирусов в куриных эмбрионах. Разработанная тест-система может быть использована для выявления вируса гриппа А птиц в качестве альтернативы или в дополнение к другим диагностическим методам. (См. статью: Жемаева Л.В. с соавт. "Разработка диагностической тест-системы на основе "сэндвич"-ИФА для выявления вируса гриппа А птиц").

"Вопр. вирусол.", 2009, № 4, с. 45 - 49.

Все новости

ФБУН НИИ эпидемиологии
и микробиологии имени Пастера
Отдел новых технологий