Реакция торможения гемагглютинации для ретроспективной диагностики гриппа птиц у млекопитающих

Для ретроспективных серо-эпидемиологических исследований сывороток крови людей с целью определения подъема уровня специфических антител к вирусу гриппа определенных серотипов чаще всего используют реакцию торможения гемагглютинации (РТГА). Это простой и надежный метод, который не требует инфекционного вируса и поэтому его можно проводить в лабораторных помещениях второго класса биобезопасности.

Однако в случае инфицирования людей высокопатогенным вирусом гриппа птиц (H5N1, H7N7) этот метод в стандартном исполнении оказался слабо чувствительным. Были предприняты попытки модифицировать методику, для чего анализировали в РТГА эритроциты разных видов животных, и было обнаружено, что оптимальная эффективность и высокая специфичность наблюдалась при использовании эритроцитов лошади. Эритроциты лошади стали успешно использовать в РТГА для определения у человека антител к вирусу гриппа птиц H5N1 и H7N7. Более того, иногда модифицированная РТГА оказывается более надежным методом детекции специфических антител к Н5 гемагглютинину в сыворотках крови людей, чем метод микронейтрализации. К сожалению, это относится не ко всем штаммам вируса гриппа птиц. Оказалось, что некоторые штаммы серотипа H5N1 не агглютинируют эритроциты лошадей. В этих случаях сыворотки исследуют методом микронейтрализации и Western Blot анализа, но эти методы или требуют использования инфекционного вируса (микронейтрализация), работы с которым ведутся в помещениях, отвечающих 3 уровню биобезопасности, или не годятся для скрининговых исследований. В связи с этим, актуальным остается исследование как нативных, так и формалинизированных эритроцитов разных видов животных для использования в РТГА. Известно, что формалинизированные эритроциты можно использовать для серологических исследований в течение 6 месяцев, и если для целей серомониторинга можно применять формалинизированные эритроциты, это значительно удешевляет скрининговые исследования.

Цель работы – сравнить использование нативных и формалинизированных эритроцитов разных видов животных при постановке реакции торможения гемагглютинации для определения уровня специфических антител к вирусу гриппа H5N1 в сыворотках млекопитающих.

В двух референс сыворотках к Н5 гемагглютинину вируса гриппа и в антисыворотках хорьков к аборигенным штаммам вируса гриппа птиц определяли уровень антител к Н5 референс антигену и штаммам вируса гриппа A/Common gull/Chany/2006 (H5N1), A/duck/Tuva/01/06 (H5N1) и A/Anas platyrhynchos/Chany Lake/9/03 (H5N3) с помощью реакции торможения гемагглютинации. Были использованы эритроциты лошади, макаки-резус, барана, морской свинки, гуся и петуха.

С помощью высокотитражных референс сывороток Н5 гемагглютинин типировался во всех использованных антигенах и со всеми использованными эритроцитами. В случае исследования сывороток хорьков антитела в РТГА с референс антигеном или не выявлялись, или выявлялись в предельно низком титре, равном 80, и только с эритроцитами лошади. Использование формалинизированных эритроцитов давало более высокие титры антител.

При серомониторинге за гриппом птиц H5N1 в человеческой популяции необходимо использовать наряду с референс антигеном аборигенные штаммы вируса гриппа A/H5N1. Можно использовать формалинизированные эритроциты лошади, макаки-резус, петуха и гуся. (См. статью: Курская О.Г. с соавт. "Реакция торможения гемагглютинации для ретроспективной диагностики гриппа птиц у млекопитающих").

"Журн. микробиол.", 2009, № 5, с. 75 - 79.

Все новости

ФБУН НИИ эпидемиологии
и микробиологии имени Пастера
Отдел новых технологий