Сравнительные данные применения высокоэффективной жидкостной хроматографии для идентификации микобактерий, выделенных на жидкой и плотной питательных средах

Микобактериозы в последние десятилетия становятся существенной проблемой здравоохранения особенно в связи с распространением ВИЧ-инфекции, поскольку у ВИЧ-инфицированных лиц (особенно на стадии СПИДа) часто развивается эта патология, которая в большом числе случаев приводит к летальному исходу. Перед микобактериологическими лабораториями стоят важные задачи по раннему выявлению и идентификации микобактерий туберкулезного комплекса и нетуберкулезных микобактерий (НТМБ). Это необходимо для своевременного проведения мероприятий по предотвращению распространения инфекции и назначения адекватной терапии, так как по клинико-рентгенологическим признакам эти заболевания зачастую схожи, а лекарственная устойчивость НТМБ, в том числе и естественная, к большинству противотуберкулезных препаратов приводит к неэффективности проводимого лечения и развитию деструктивных поражений легких и диссеминированных процессов, ассоциирующихся со СПИДом.

Высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ) рекомендована Centers for Disease Control and Prevention (CDC, США) для использования в микобактериологических референс-лабораториях как стандартный метод для идентификации видов, входящих в род Mycobacterium. Идентификация вида микобактерий методом ВЭЖХ основана на анализе состава высокомолекулярных миколовых кислот клеточной стенки с последующей оценкой результатов при помощи специального программного обеспечения и базы данных хроматографических профилей.

Содержание миколовых кислот в клеточной стенке является устойчивым фенотипическим признаком, что позволяет получать достоверные, воспроизводимые результаты для определенного вида микобактерий. Высокая чувствительность метода за счет применения флюоресцентного детектора дает возможность анализировать образцы даже с небольшим содержанием бактериальных клеток, что значительно снижает сроки идентификации.

Исследованы 242 культуры микобактерий, выделенные из клинического материала на плотной питательной среде Левенштейна-Йенсена и 208 – в автоматизированной системе Bactec MGIT-960 (на модифицированной жидкой питательной среде Миддлбрук 7Н9), в том числе M.tuberculosis 85 и 82 соответственно, M.kansasii 26 и 24, M. avium complex 46 и 38, M.xenopi 24 и 20, M.fortuitum 26 и 22, M.chelonae/abscessus complex 20 и 18. При идентификации микробиологическим методом и методом ВЭЖХ культур микобактерий, выделенных на плотной питательной среде, совпадение результатов выявлено в 95,5% и в 97,2% - на жидкой, при этом среди быстрорастущих нетуберкулезных микобактерий - в 95,8% и 95,2% соответственно, медленнорастущих – в 91,7% и 97,8%, а M.tuberculosis - в 96,5% и 97,6% соответственно. Выделение микобактерий на жидкой питательной среде Миддлбрук 7Н9 в автоматизированной системе Bactec MGIT 960 занимает более короткое время, чем на плотной. Идентификация вида микобактерий микробиологическим методом занимает до 3 недель, тогда как применение ВЭЖХ сокращает ее время до 24 часов. Эффективность метода ВЭЖХ не зависит от того, на плотных или жидких питательных средах выделены культуры микобактерий. (См. статью: Макарова М.В. с соавт. "Сравнительные данные применения высокоэффективной жидкостной хроматографии для идентификации микобактерий, выделенных на жидкой и плотной питательных средах").

"Туберкулез и болезни легких", 2009, № 10, с. 46 - 48.

Все новости

ФБУН НИИ эпидемиологии
и микробиологии имени Пастера
Отдел новых технологий