Индукция гамма-интерферона в образцах цельной крови in vitro – тест для определения туберкулезного инфицирования детей и подростков

Диагностика туберкулезной инфекции у детей, в том числе дифференцирование туберкулезного инфицирования детей от поствакцинной туберкулиновой аллергии, является одной из наиболее актуальных проблем детской фтизиатрии. Для специфической диагностики туберкулезной инфекции у детей при отсутствии выраженных рентгенологических изменений необходимо использовать новые методы, которые должны быть неинвазивными и неаллергичными. Современные иммунологические и молекулярно-биологические методы могут удовлетворить этим требованиям и повысить эффективность диагностики туберкулезной инфекции у детей.

Разработанные и изученные в последние годы в странах Европы и США тест-системы QuantiFERON-TB и QuantiFERON-TB-Gold рассматриваются в качестве тестов для определения туберкулезной инфекции и основаны на измерении иммунного ответа Т-лимфоцитов на микобактериальные антигены, выраженного продукцией гамма-интерферона (гамма-ИФН) в 24-часовой культуре цельной крови. В тест-системе QuantiFERON-TB в качестве специфического индуктора гамма-ИФН используется стандартный туберкулин ППД и неспецифический стимулятор фитогемагглютинин. После того как рядом исследований в области молекулярной биологии микобактерий были установлены гены, делетированные (отсутствующие) у микобактерий вакцинного штамма M.bovis (BCG) - область RD1, эти гены, специфичные в отношении микобактерий туберкулеза (МБТ), были клонированы, и получены соответствующие белки, в частности ESAT-6 (ранний секретируемый антиген) и CFP-10 (белок культурального фильтрата), которые затем были использованы в усовершенствованной тест-системе QuantiFERON-TB-Gold в качестве специфических индукторов. Поскольку эти антигены отсутствуют не только у микобактерий вакцинного штамма, но и у большинства нетуберкулезных микобактерий окружающей среды, за исключением Mycobacterium marinum и Mycobacterium kansasii, их применение повышает специфичность получаемых результатов. В этом случае предварительная БЦЖ-вакцинация не оказывает значительного влияния на результаты инфекции гамма-ИФН in vitro. Ряд исследователей отмечают важные преимущества этого метода перед кожной туберкулиновой пробой. В частности, этот метод позволяет проводить повторные исследования в короткое время и не требует повторного (через 48 - 72 ч) посещения для измерения результатов кожного теста.

При использовании рекомбинантных антигенов ESAT-6 и CFP-10, специфично присутствующих в M.tuberculosis, но отсутствующих у M.bovis (BCG), этот тест был положительным при активной туберкулезной инфекции в 89% случаев, но отрицательным у БЦЖ-вакцинированных с минимальным риском туберкулезного контакта (специфичность – 98%).

Основной целью работы явилось изучение уровня индукции гамма-ИФН клетками цельной крови in vitro в присутствии специфического антигена туберкулезного возбудителя у детей и подростков при первичной туберкулезной инфекции в сравнении с поствакцинной БЦЖ-аллергией.

Представлены данные о разработке отечественной тест-системы определения инфицирования МБТ детей и подростков на основе метода индукции гамма-ИФН в образцах цельной крови in vitro с использованием специфического для МБТ антигена ESAT-6. Полученные результаты демонстрируют возможность указанного метода определения первичной туберкулезной инфекции без развития локальных форм туберкулеза легких, с чувствительностью – 94% при специфичности – 97%. Изученный метод для определения инфицирования МБТ детей и подростков и дифференцирования этого состояния от поствакцинной туберкулиновой БЦЖ-аллергии демонстрирует высокую эффективность и может быть использован в клинической практике после соответствующей регистрации. (См. статью: Мордовская Л.И. с соавт. "Индукция гамма-интерферона в образцах цельной крови in vitro – тест для определения туберкулезного инфицирования детей и подростков").

"Пробл. туберкулеза", 2009, № 6, с. 19 - 24.

Все новости

ФБУН НИИ эпидемиологии
и микробиологии имени Пастера
Отдел новых технологий