Биолюминесцентный экспресс-метод оценки антибиотикочувствительности возбудителя

Быстрый скрининг чувствительности микроорганизмов к антибиотикам in vitro позволяет своевременно назначать курс эффективной антимикробной терапии, а также предотвращает появление полирезистентных штаммов возбудителя. В клинической практике для этих целей чаще всего используют диско-диффузионный метод (ДДМ), либо метод серийных разведений (МСР) – автоматизированный или ручной. Для этих методов необходимо предварительно выделять чистую культуру возбудителя из клинического образца, для чего требуется 18 - 24 и более часов. Далее, в случае ДДМ, чистую культуру возбудителя инкубируют на агаризованной питательной среде, на поверхность которой помещают диски с испытуемыми антибиотиками. По диаметру зон подавления роста возбудителя судят об эффективности антибиотиков против данного возбудителя. Недостатками ДДМ является большая продолжительность (от 18 и более часов) и трудоемкость анализа, зависимость его результатов от правильности приготовления стандарта мутности микробной суспензии и ряда неконтролируемых факторов: незначительного изменения состава, влажности или сдвига рН агаризованной питательной среды и так далее. В случае МСР сравнивают скорости роста чистой культуры возбудителя (по изменению оптической плотности микробной суспензии) в течение 12 и более часов в присутствии (проба) и при отсутствии (контроль) исследуемого антибиотика. МСР в автоматизированном варианте позволяет оценивать антибиотикочувствительность возбудителя быстрее, но требует дорогостоящего оборудования и ограничивает исследователя имеющимся в лаборатории коммерческим набором планшетов с антибиотиками для инкубирования культуры возбудителя.

В основу использованного метода положено измерение биолюминесценции (свечения), возникающей при взаимодействии аденозин-5-трифосфата (АТФ) с АТФ-реагентом (готовой реакционной смесью, содержащей фермент – люциферазу светляков и люциферин). Интенсивность биолюминесценции пропорциональна концентрации АТФ в реакционной смеси, которая, в свою очередь, пропорциональна титру жизнеспособных микробных клеток в анализируемом образце. При проведении анализа сравнивали интенсивность биолюминесценции в аликвотах микробной суспензии, содержащих исследуемые антибиотики (проба) и без антибиотика (контроль) через 5 часов инкубирования и рассчитывали коэффициент подавления роста микробных клеток под действием антибиотика. Предложены критерии оценки антибиотикочувствительности возбудителя биолюминесцентным методом. Результаты оценки антибиотикочувствительности возбудителя, полученные предложенным методом и ДДМ, либо МСР, хорошо совпали (коэффициент корреляции более 88%). (См. статью: Фрунджян В.Г. с соавт. "Биолюминесцентный экспресс-метод оценки антибиотикочувствительности возбудителя").

"Антибиотики и химиотерапия", 2009, № 7 - 8, с. 8 - 12.

Все новости

ФБУН НИИ эпидемиологии
и микробиологии имени Пастера
Отдел новых технологий