Разработка и применение отечественной тест-системы диагностики туберкулезного инфицирования на основе количественного анализа индукции интерферона-гамма в образцах цельной крови in vitro с использованием специфических рекомбинантных антигенов

Традиционно первичная туберкулезная инфекция у детей и подростков определяется с помощью внутрикожного теста с туберкулином PPD, по результатам которого при наличии дополнительных показаний назначают профилактическую химиотерапию. Однако в связи с вакцинацией и ревакцинацией в подростковом возрасте вакциной БЦЖ дифференциальная диагностика поствакцинальной аллергии и туберкулезного инфицирования представляет немалые трудности.

В последние годы идентифицировано несколько белков - основных специфических для Mycobacterium tuberculosis (МБТ) антигенов, которые отсутствуют в БЦЖ. В странах Европы и Северной Америки в последние годы разработаны тест-системы для определения иммунного ответа на антигены микобактерий туберкулеза, основанные на количественном анализе индуцированного антигенами интерферона-гамма (ИФН-гамма) – QuantiFERON-TB-Gold (производитель австралийская фирма "Cellestis"), а также QuantiFERON-TB-Gold In Tube (анализ проводится в пробирках) или на измерении количества Т-лимфоцитов, продуцирующих ИФН-гамма (T-SPOT.TB). При использовании специфических для МБТ рекомбинантных антигенов ESAT-6 и CFP-10 этот тест был положительным при активной туберкулезной инфекции в 89% случаев, но отрицательным у 98% вакцинированных БЦЖ с минимальным риском туберкулезного контакта.

Авторы статьи представляют результаты разработки и применения отечественной тест-системы для оценки иммунного ответа и определения туберкулезного инфицирования с помощью количественного анализа антигенспецифической индукции ИФН-гамма в образцах цельной крови.

Разработана тест-система определения туберкулезного инфицирования путем количественного анализа ИФН-гамма в образцах плазмы крови после 20 - 24 часов инкубации образцов цельной крови в присутствии антигенов микобактерий туберкулеза: туберкулина PPD и смеси специфических для Mycobacterium tuberculosis и рекомбинантных антигенов ESAT-6 и CFP-10.

Для анализа используют 3 пробирки по 1 мл гепаринизированной венозной крови, одна из которых служит контролем, а в двух других измеряют антигениндуцированную продукцию ИФН-гамма. Изучено применение этой тест-системы для определения первичного туберкулезного инфицирования у 277 детей и подростков. Выявлен пороговый диагностический уровень индукции ИФН-гамма (70 пг/мл), определяемый в пробирке со смесью антигенов ESAT-6 и CFP-10.

При наличии индукции ИФН-гамма в пробирке с туберкулином и отсутствии диагностического уровня ИФН-гамма в пробирке с антигенами ESAT-6 и CFP-10 определяется поствакцинальная аллергия. Диагностическая чувствительность определения первичной туберкулезной инфекции составляет 97,6% при 94,4% специфичности, позволяющей дифференцировать туберкулезную инфекцию от поствакцинальной аллергии. При относительно распространенных формах туберкулеза легких уровень антигениндуцированного ИФН-гамма может быть сниженным. (См. статью: Владимирский М.А. с соавт. "Разработка и применение отечественной тест-системы диагностики туберкулезного инфицирования на основе количественного анализа индукции интерферона-гамма в образцах цельной крови in vitro с использованием специфических рекомбинантных антигенов").

"Клин. лаб. диагностика", 2010, № 1, с. 49 - 54.

Все новости

ФБУН НИИ эпидемиологии
и микробиологии имени Пастера
Отдел новых технологий