Оптимизация метода ПЦР для наиболее информативного и экономичного выявления возбудителей негонококковых урогенитальных инфекций (НУГИ)

НУГИ - группа инфекционных клинически полиморфных заболеваний гениталий человека, вызываемых вирусами, бактериями родов Chlamydia, Mycoplasma, Ureaplasma и их ассоциациями.

Решающую роль при постановке диагноза имеют результаты лабораторных исследований. Однако лабораторная диагностика НУГИ сопряжена с рядом трудностей. Вирусы группы герпеса, папилломавирусы, хламидии и микоплазмы являются труднокультивируемыми или некультивируемыми микроорганизмами, что затрудняет их выявление в практических лабораториях традиционными бактериологическими и вирусологическими методами.

Значительные достижения в изучении данной группы возбудителей и диагностике НУГИ связаны с использованием современных молекулярно-генетических методов диагностики, в частности ПЦР. Одной из существенных проблем ПЦР диагностики НУГИ является разработка эффективных схем и алгоритмов детекции представителей этой многообразной группы инфекционных агентов.

Анализ результатов обследования обширного контингента за длительный период времени (10 лет) позволяет рекомендовать комплексное ПЦР обследование взрослых пациентов с одновременным выявлением U.urealyticum, М.hominis, С.trachomatis, Суtomegalovirus и Неrреs simрlex I/II. Одновременное выявление этих пяти инфекционных агентов позволяет получить максимальную информацию и снизить стоимость исследования, поскольку проводится только одна пробоподготовка. У мужчин исследуется смесь соскоба уретры и утренней порции мочи; у женщин смесь соскобов слизистых уретры, влагалища и цервикального канала. Выделенный препарат ДНК сохраняется до получения результата анализа лечащим врачом. В случае необходимости этот материал может быть исследован на наличие других вирусов и бактерий. В частности, наряду с выявлением U.urealyticum, М.hominis, С.trachomatis, Суtomegalovirus и Неrреs simрlex I/II при наличии морфологических изменений эпителия слизистых важен тест на папилломавирусы высокого канцерогенного риска. Тест-система "Папилломавирус-скрининг" (разработка ЦНИИЭ Роспотребнадзора) является наиболее приемлемой для практических исследований. Она позволяет в одной ПЦР-реакции выявлять потенциально опасные папилломавирусы 14 генотипов, включая 6 наиболее значимых - 16, 18, 31, 33, 35, 45.

При комплексном ПЦР обследовании новорожденных, детей первых лет жизни и детей дошкольного и школьного возрастов также рекомендуется проводить одновременное выявление U.urealyticum, М.hominis, С.trachomatis, Суtomegalovirus, Неrреs simрlex I/II. Исследование на данный спектр инфекционных агентов позволяет выявлять большую часть всех атипичных возбудителей, встречающихся у данного контингента. При клинических проявлениях инфекционно-аллергических заболеваний дыхательной системы, врожденной дисфункции кишечника или наличии их в анамнезе к 5-ти инфекционным агентам добавляется тест на бактерии рода Мусорlаsmа.

В качестве объекта исследования рекомендуется использовать смесь крови, слюны, мочи, слезного отделяемого (смыва с конъюнктивы). Все субстраты, за исключением крови, берутся неинвазивными методами. Использование смеси повышает эффективность детекции возбудителей. Каждый из них по результатам наших исследований, может встречаться в любом из четырех субстратов, в одном или нескольких. Источник выявления обусловливается формой патологии, локализацией очагов поражения и рядом других причин. По результатам наших исследований частота выявления уреаплазм, микоплазм, хламидий, вирусов группы герпеса у больных детей составила (суммарно): в крови – 1 - 5%; в слезном отделяемом – 8 - 10%; моче – 20 - 25%; слюне – 30 - 37%; в смеси субстратов – 48 - 50%. Было показано, что разбавление в процессе смешивания четырех субстратов на чувствительности метода не отразилось. (См. статью: Мазепа В.Н. с соавт. "Оптимизация метода ПЦР для наиболее информативного и экономичного выявления возбудителей негонококковых урогенитальных инфекций (НУГИ)").

"Научное обеспечение противоэпидемической защиты населения". Н. Новгород, 2009, с. 149 - 151.

Все новости

ФБУН НИИ эпидемиологии
и микробиологии имени Пастера
Отдел новых технологий