Использование рН-чувствительных иммобилизованных моноклональных антител для оптимизации иммуноферментного сэндвич-метода определения HBsAg вируса гепатита В

Сэндвич-метод позволяет достигать более высокой чувствительности и специфичности по сравнению с другими иммунохимическими методами. Благодаря тому, что узнавание антигена происходит по двум различным сайтам белка, существенно уменьшается вероятность как ложноположительных, так и ложноотрицательных ответов. Разработка новых высокочувствительных тест-систем для определения HBsAg, построенных по принципу сэндвич-метода, продолжает быть актуальной задачей. Из теории иммуноферментного анализа следует, что такой важнейший параметр, как минимальная достоверно определяемая концентрация антигена, зависит от аффинности используемых антител и концентрации активных антигенсвязывающих сайтов на поверхности твердой фазы, которая может значительно снижаться при пассивной сорбции (например, на пластиковую поверхность). Цель работы – получение высокочувствительного сэндвич-метода определения НВsАg в сыворотке крови. Анализ возможности оптимизации твердой фазы в иммуноферментом сэндвич-методе определения НВsАg путем вариации рН сорбции моноклональных антител на поверхность иммунных планшетов.

Сравнивали калибровочные кривые для определения НВsАg в сэндвич-методах, использующих 36 возможных парных сочетаний моноклональных антител нашей панели (включающей высокоаффинные антитела к НВsАg, продуцируемые шестью гибридомами). Иммобилизацию антител на твердой фазе (путем пассивной сорбции) проводили при различных значениях рН (2,8; 7,5 и 9,5).

Анализ панели антител из 6 гибридом к НВsАg выявил рН-чувствительные моноклональные антитела (18С8), иммобилизация которых при низких значениях рН (2,8) с детектирующими антителами F4FЗ позволила резко увеличить чувствительность сэндвич-метода. Минимальная достоверно определяемая концентрация НВsАg в сыворотках больных, инфицированных вирусом гепатита В, составляла 0,013 — 0,017 нг/мл. Валидация сэндвич-метода была проведена на сертифицированной панели сывороток с различными концентрациями НВsАg (разных серотипов).

Сконструирован высокочувствительный сэндвич-метод определения НВsАg. Показано, что анализ панели моноклональных антител на рН-чувствительность может использоваться в качестве простого методического приема для оптимизации иммуноферментных сэндвич-методов определения различных антигенов. (См. статью: Яковлева Д.А. с соавт. “Использование рН-чувствительных иммобилизованных моноклональных антител для оптимизации иммуноферментного сэндвич-метода определения HBsAg вируса гепатита В”).

"Журн. микробиол.", 2010, № 2, с. 85 - 89.

Все новости

ФБУН НИИ эпидемиологии
и микробиологии имени Пастера
Отдел новых технологий