Возможность использования рекомбинантных доменов иммуноглобулиноподобного белка LigA в качестве перспективных маркеров для тестирования сывороток крови больных лептоспирозами

Лептоспирозы относятся к числу повсеместно распространенных природно-очаговых инфекций человека и животных, вызываемых патогенными лептоспирами. Одним из наиболее важных факторов вирулентности лептоспир считаются нефимбрильные адгезины двух семейств. К одному семейству относятся три альфа-подобных интегрина, которые предположительно являются трансмембранными белками и принимают участие в поверхностных лиганд-связывающих взаимодействиях. К другому семейству нефимбрильных адгезинов принадлежат иммуноглобулиноподобные белки лептоспир (leptospiral immunoglobulin like, Lig-белки), которые характеризуются наличием повторяющихся иммуноглобулиноподобных доменов, содержащих 90 а.о. Экспрессия генов lig, обнаруженных в геноме патогенных лептоспир, наблюдается только in vivo, при многократном пассировании вирулентных штаммов в культуре она значительно снижается либо отсутствует совсем. Кроме того, установлено, что Lig-белки распознаются иммунной системой при инфицировании и специфические антитела к ним появляются в крови уже на ранних стадиях заболевания. В одной из последних работ показано, что рекомбинантный LigA может служить перспективным диагностическим маркером для иммуноанализа, способным выявлять специфические антитела классов М и G. Кроме того, липопротеины LigA и LigВ обладают также протективными свойствами и считаются одними из наиболее перспективных компонентов для разработки кандидатных субъединичных вакцин.

Цель работы – клонировать в клетках Escherichia coli последовательность ДНК, кодирующую консервативный домен белка LigA Leptospira interrogans, и изучить антигенные свойства полученного химерного белка.

Использовали штамм E.coli M15 [pREP4], рекомбинантную плазмиду рТТ10, кодирующую целлюлозосвязывающий домен (CBD), эндонуклеазы рестрикции BamHI, Bg1I, Bg1II, XbaI, Т4ДНК-лигазу, РНКазу. Проводили молекулярное клонирование интересующего фрагмента гена LigA по стандартным протоколам, экспрессию гибридных генов в соответствии с протоколами фирмы "QIAGEN". Выделение и очистку белков проводили по оригинальной методике.

В клетки E.coli клонирован фрагмент, кодирующий иммуноглобулиноподобный домен 5 LigA . Получен эффективный штамм-продуцент химерного белка D5-CBD, состоящего из иммуноглобулиноподобного домена 5 LigA , глицинсеринового спейсера и целлюлозосвязывающего домена (CBD). Методом одностадийной очистки на целлюлозе получен высокоочищенный препарат белка D5-CBD. Изучена антигенная специфичность полученного химерного белка, показана возможность его использования в качестве маркера для разработки диагностической тест-системы на основе непрямого ИФА.

При синтезе в клетках Е.coli в составе химерного белка рекомбинантный домен LigA сохраняет антигенные свойства, присущие нативному белку. Полученные результаты подтверждают возможность использования рекомбинантного антигена D5-CBD в качестве маркера для разработки диагностических тест-систем на основе непрямого ИФА. (См. статью: Шарапова Н.Е. с соавт. "Возможность использования рекомбинантных доменов иммуноглобулиноподобного белка LigA в качестве перспективных маркеров для тестирования сывороток крови больных лептоспирозами").

"Журн. микробиол.", 2010, № 2, с. 79 - 84.

Все новости

ФБУН НИИ эпидемиологии
и микробиологии имени Пастера
Отдел новых технологий