Разработка панели моноклональных антител для выявления цитотоксина CagA Helicobacter pylori

Цитотоксин CagA Helocobacter pylori является иммунодоминантным вариабельным белком, который транспортируется из бактериальной клетки внутрь эпителиоцитов слизистой желудка человека и нарушает в них системы внутриклеточной передачи сигнала. Таким образом, CagA изменяет морфологию, подвижность, секреторную активность, процессы пролиферации и апоптотической гибели клеток хозяина. Белок CagA признан одним из основных факторов, определяющих вирулентность H.pylori, поскольку инфекции экспрессирующими цитотоксин (CagA-позитивными) штаммами сопряжены с повышенным риском развития заболеваний гастродуоденальной зоны, в том числе онкологических. Определение CagA-статуса возбудителя инфекции признано эффективным подходом в диагностике хеликобактер-ассоциированных заболеваний. Одним из перспективных приемов, позволяющих выявить H.pylori и оценить его вирулентный потенциал, является иммунодиагностика. Высокая специфичность, чувствительность и воспроизводимость выявления белка CagA и антител к нему в организме человека могут быть достигнуты благодаря использованию стандартизованных препаратов антигенов и моноклональных антител (МКАТ) с охарактеризованными свойствами. В настоящее время спектр таких иммунохимических реагентов ограничен, поскольку получение антигена – чистого белка CagA в препаративных количествах из H.pylori практически невозможно. Для решения проблемы были созданы четыре рекомбинантных фрагмента белка CagA, экспрессированные в Escherichia coli в виде химерных белков, слитых с N-терминальным гексагистидиновым мотивом.

Цель работы – создание и исследование иммунохимических свойств МКАТ против цитотоксина CagA H.pylori с использованием рекомбинантных фрагментов CagA белка.

Применены стандартные методики создания и отбора гибридом, различные варианты иммуноферментного анализа и иммуноблот. С помощью амплификации фрагментов гена CagA проведено молекулярно-генетическое типирование культур H.pylori.

Создана панель МКАТ, которые распознают на молекуле CagA четыре различные линейные эпитопа, три из которых локализованы в консервативных участках цитотоксина, а один расположен в вариабельной области CagA. На основе пары полученных антител разработана система двухцентрового ИФА для количественного определения белка CagA, которая характеризуется высокой чувствительностью и специфичностью. Полученные МКАТ позволяют с помощью иммунохимических методов анализа различать CagA-позитивные и CagA-негативные штаммы H.pylori. Полученные МКАТ открывают перспективы для исследования молекулы цитотоксина H.pylori и конструирования иммунодиагностических тест-систем, направленных на выявление CagA-антигена. (См. статью: Климович А.В. с соавт. "Разработка панели моноклональных антител для выявления цитотоксина CagA Helicobacter pylori").

"Журн. микробиол.", 2010, № 3, с. 62 - 67.

Все новости

ФБУН НИИ эпидемиологии
и микробиологии имени Пастера
Отдел новых технологий