Применение ПЦР в режиме реального времени для диагностики различных клещевых инфекций

В течение последних пяти лет сотрудники ЦНИИ эпидемиологии изучали иксодовых клещей, собранных в центральном регионе страны (Московская и Ярославская области), в Поволжье (Удмуртия), северо-западном регионе страны (Вологодская область), на Урале (Свердловская, Курганская и Челябинская области), в Сибири (Новосибирская, Иркутская и Кемеровская области). Во всех регионах в клещах Ixodes persulcatus были выявлены вирус клещевого энцефалита (за исключением Московской области), боррелии комплекса Borrelia burgdorferi sensu lato, Anaplasma phagocytophillum и Erlichia muris. От 10 до 15 процентов клещей, положительных в ПЦР на какой-либо из вышеперечисленных возбудителей, содержали одновременно два патогена. В клещах I.persulcatus, собранных в данных регионах, также выявляли Borrelia miyаmotoi. Эту боррелию, впервые обнаруженную в клещах I.persulcatus в Японии в 1995 г., впоследствии находили в Ixodes ricinus во Франции, Германии и Швеции, в Ixodes scapularis и Ixodes pasificus в Северной Америке, хотя уровень зараженности клещей был невысок, обычно не более 4%. Генетически B.miyamotoi принадлежит к группе боррелий – возбудителей возвратных лихорадок, но случаи заболеваний человека, вызванные этой боррелией, не были описаны, за одним исключением: авторам удалось обнаружить РНК B.miyamotoi в крови 25 больных иксодовым клещевым боррелиозом в Ижевске в 2003 г.

Цель работы – создание и испытание комплекса ПЦР-методик для выявления патогенов, переносимых клещами, в клиническом материале и объектах окружающей среды.

Разработаны методики ПЦР с гибридизационно-флюоресцентной детекцией в режиме реального времени для детекции вируса клещевого эецефалита, Borrelia burgdorferi sensu lato, Anaplasma phagocytophillum, Erlichia muris/E.chaffeensis и Borrelia miyamotoi. Первые 4 методики объединены в одну тест-систему в формате мультипрайм. Эффективность комплекса методик оценена путем исследования проб крови больных иксодовым клещевым боррелиозом (166 пациентов), клещевым энцефалитом (22 пациента) и микст-инфекцией – клещевой энцефалит + боррелиоз (21 пациент) из Свердловской области.

Показано, что при ПЦР-исследовании проб крови, взятых при поступлении больного, возможно установление этиологии заболевания у 39% больных, в то время как на основании серологических данных диагноз, как правило, ставится не ранее второй недели лечения. Ложно-положительные результаты ПЦР-диагностики отсутствовали. Заболевания, вызванные анаплазмой или эрлихиями, методом ПЦР не выявлены. Показано, что более 50% случаев клещевого боррелиоза в безэритемной форме были вызваны B.miyamotoi, среди возбудителей боррелиоза в эритемной форме преобладали боррелии комплекса B.burgdorferi sensu lato.

Предложенный комплекс методик полезен для экспресс-диагностики клещевых инфекций, включая ранее неизвестную инфекцию, вызванную B.miyamotoi.(См. статью: Карань Л.С. с соавт. "Применение ПЦР в режиме реального времени для диагностики различных клещевых инфекций").

"Журн. микробиол.", 2010, № 3, с. 72 - 77.

Все новости

ФБУН НИИ эпидемиологии
и микробиологии имени Пастера
Отдел новых технологий