Прямой ускоренный метод выявления возбудителя коклюша

Основным методом лабораторного подтверждения диагноза коклюша является выделение и идентификация возбудителя – Bordetella pertussis. Бактериологическая диагностика коклюша от начала исследования до выдачи ответа занимает от 5 до 7 дней, и эффективность выделения возбудителя в практических условиях не превышает 10%. Низкая высеваемость микроорганизмов рода Bordetella обусловлена большим числом факторов, в частности низкой выживаемостью во внешней среде, поздним обследованием больных, применением антибиотиков до начала обследования, недостаточной кратностью обследования, неправильным взятием исследуемого материала и так далее. Существующие серологические методы лабораторной диагностики коклюша информативны только к 4-й неделе заболевания и поэтому могут быть использованы только для ретроспективного анализа.

В связи с этим использование молекулярно-генетических технологий является перспективным направлением для индикации возбудителя коклюша.

К концу 1980-х годов опубликованы данные более чем о 100 вариантах полимеразной цепной реакции (ПЦР) для идентификации возбудителя коклюша, основанных на выявлении различных мишеней в геноме B.pertussis. Однако такие варианты обладают различной специфичностью, чувствительностью и чаще всего свидетельствуют только о наличии штаммов рода Bordetellа. В 2000 г. предложена новая молекулярно-генетическая технология, основанная на изотермальной амплификации ДНК (loop-mediated isothermal amplification – LAMP), которая обладает высокой чувствительностью, специфичностью и амплификационной эффективностью, многократно превышающей ПЦР. Такая технология явилась основой модифицированных методов и успешно применяется для диагностики большого числа микроорганизмов, в том числе для межштаммовой дифференциации представителей рода Bordetella – штаммов B.pertussis от штаммов B.parapertussis и B.bronchiseptica. Вместе с тем для практического здравоохранения наиболее важным является выявление возбудителя непосредственно в клиническом материале от больного.

Разработанный прямой метод лабораторной диагностики коклюша, основанный на изотермальной амплификационной технологии, обладает высокой (100%) специфичностью и чувствительностью (100 м. кл.), позволяет выявлять возбудителя заболевания в течение 7 - 8 часов от начала исследования непосредственно в клиническом материале от больного. Проведенные клинические испытания на базе ИКБ №1 (Москва) при обследовании 103 пациентов (63 больных с клиническим диагнозом коклюша и 40 пациентов с другими заболеваниями дыхательных путей) подтвердили его высокую специфичность и диагностическую эффективность по сравнению с бактериологическим методом; эффективность при различных клинических формах заболевания и при обследовании больных в различные сроки от начала заболевания, а также при обследовании больных с подозрением на коклюш и коклюшеподобные заболевания. (См. статью: Борисова О.Ю. с соавт. "Прямой ускоренный метод выявления возбудителя коклюша").

"Клин. лаб. диагностика", 2010, № 5, с. 53 - 55.

Все новости

ФБУН НИИ эпидемиологии
и микробиологии имени Пастера
Отдел новых технологий