Разработка тест-системы для количественной детекции ДНК бактерий Escherichia coli, Streptococcus agalactiae, а также представителей рода Klebsiella методом ПЦР-РВ в экспресс-диагностике перинатальных инфекций

Одной из наиболее актуальных и сложных проблем в современной перинатологии является проблема инфекционных заболеваний. Организм новорожденного ребенка, и особенно недоношенного, в силу незрелости иммунной системы и факторов неспецифической резистентности в высокой степени подвержен риску инфицирования патогенными и условно-патогенными микроорганизмами. Успешное решение проблемы перинатальных инфекций состоит в их предупреждении и в патогенетически оправданном и своевременном лечении, которое зависит от использования новых диагностических и лечебных технологий.

Принимая во внимание скорость развития инфекционного процесса у новорожденного ребенка, особую значимость приобретает использование в неонатальной клинике метода экспресс-диагностики. В то же время существующие методы не всегда оказываются достаточно чувствительными для выявления патогенных микроорганизмов. В связи с этим в последние годы особое внимание уделяется разработке экспресс-методов диагностики бактериальных и вирусных инфекций в неонатологии, основанных на эффектах молекулярной гибридизации и амплификации нуклеиновых кислот полимеразной цепной реакции. Эти методы отличаются высокой чувствительностью и специфичностью, низкой зависимостью от квалификации лабораторного персонала и позволяют обнаруживать присутствие микроорганизмов в микроколичествах исследуемого материала и за короткое время. В качестве объекта исследования может быть использован любой биологический материал, включая околоплодные воды, ворсинки хориона, пуповинную кровь, слюну и другие. Современные модификации этих методов позволяют проводить не только качественное определение присутствия патогенных микроорганизмов в исследуемом материале, но и устанавливать их количественное содержание.

В работе описано создание диагностической тест-системы, основанной на принципе мультипраймерной полимеразной цепной реакции в режиме реального времени и предназначенной для одновременной детекции Escherichia coli, Streptococcus agalactiae и бактерий рода Klebsiella в различных типах клинического материала. В ходе проведенного исследования был осуществлен дизайн последовательностей праймеров и олигонуклеотидных зондов Taqman, а также подбор оптимальных условий проведения реакций амплификации. Был создан набор рекомбинантных плазмид для использования в качестве калибраторных ДНК и ДНК внутреннего контроля. Помимо этого был предложен оптимальный вариант методики выделения ДНК из клинического материала. Апробация разработанной тест-системы проводилась с использованием симулированных клинических образцов, а также клинических образцов, полученных от недоношенных новорожденных. Разработанная тест-система продемонстрировала высокую диагностическую чувствительность и специфичность и после проведения дополнительных испытаний может быть внедрена в клиническую практику. (См. статью: Володин Н.Н. с соавт. "Разработка тест-системы для количественной детекции ДНК бактерий Escherichia coli, Streptococcus agalactiae, а также представителей рода Klebsiella методом ПЦР-РВ в экспресс-диагностике перинатальных инфекций").

"Инфекционные болезни", 2010, № 2, с. 42 - 46.

Все новости

ФБУН НИИ эпидемиологии
и микробиологии имени Пастера
Отдел новых технологий