Моноклональные антитела против секреторного компонента человека: эпитопная специфичность и применение в иммуноанализе

Секреторный компонент (SC) присутствует в секретах слизистых оболочек в составе секреторных иммуноглобулинов (SIgA и SIgM ), а также в виде свободных молекул. SIgA как доминирующий класс антител в мукозальных секретах выполняет роль фактора защиты организма от патогенов и регуляции симбиотических отношений с микрофлорой. Содержание SIgA и свободного SC в секреторных жидкостях является показателем состояния местного иммунитета организма. Определение концентраций этих молекул в секретах слизистых оболочек дыхательного, пищеварительного, урогенитального тракта необходимо при диагностике иммунодефицитов, вирусных и бактериальных инфекций, а также при оценке эффективности пероральной вакцинации. Методы детекции SC и SIgA основаны на антигенных различиях SC свободного и ковалентно связанного с тяжелыми цепями полимерного IgA. Так, на SC имеются эпитопы двух категорий: постоянно экспонируемые на свободном SC и на SIgA и так называемые криптические детерминанты, которые после образования молекулярного комплекса SIgA маскируются прилежащими участками альфа- и легких цепей Ig. Дифференциальное выявление свободного SC и молекул SIgA требует таких высокоспецифичных реагентов, какими являются моноклональные антитела (МКАТ).

Цель настоящей работы состояла в создании и иммунохимической характеристике панели МКАТ, распознающих различные антигенные детерминанты молекулы SC.

SIgA и SC выделяли из молозива сочетанием ионообменной хроматографии и гель-фильтрации. Рекомбинантный SC был экспрессирован в клетках Escherichia coli, трансформированных конструкцией, содержащей фрагмент гена, кодирующего экстраклеточный участок рецептора полимерных Ig. МКАТ получали и изучали, используя приемы гибридомной технологии и различные варианты иммуноферментного анализа.

Создана и иммунохимически охарактеризована панель из 10 МКАТ против SC человека, среди которых 4 антитела направлены против криптических эпитопов свободного SC и 6 МКАТ распознают эпитопы, экспонируемые как на SC, так и на SIgA. Панель МКАТ содержит антитела, взаимодействующие с конформационными и линейными эпитопами антигена. Три из полученных МКАТ связывают эпитопы SC, структура которых определяется наличием в молекуле антигена углеводных остатков. Разработаны иммунометрические системы для дифференциальной детекции свободного SC и SIgA.

Созданная и охарактеризованная панель МКАТ, распознающих различные эпитопы молекулы SC, открывает новые возможности для лабораторно-диагностических и фундаментальных исследований секреторного иммунитета человека. (См. статью: Грязева И.В. с соавт. "Моноклональные антитела против секреторного компонента человека: эпитопная специфичность и применение в иммуноанализе").

"Журн. микробиол.", 2010, № 4, с. 54 - 59.

Все новости

ФБУН НИИ эпидемиологии
и микробиологии имени Пастера
Отдел новых технологий