Экспресс-метод оценки титра вируса краснухи в вируссодержащей жидкости с помощью ПЦР-РВ

Одной из основных проблем при производстве вакцин является оценка титра вируса в процессе культивирования для определения времени сбора вирусного материала. Классические методы оценки специфической активности вируса краснухи – реакция бляшкообразования и реакция цитопатического действия, основанные на цитопатическом действии вируса на чувствительную клеточную линию. Недостатками этих методов являются их длительность и трудоемкость. Количественная оценка специфической активности вируса краснухи в реакциях бляшкообразования и цитопатического действия занимает около 12 дней. Другие недостатки включают субъективность анализа, сложность в стандартизации и зависимость от внешних факторов. Например, бляшки могут быть сложны в подсчете, особенно для аттенуированного штамма вируса краснухи, который образует очень маленькие, неясные бляшки.

Цель исследования – разработка метода оценки титра вируса краснухи в вируссодержащей жидкости с помощью ПЦР с флуоресцентной детекцией в режиме реального времени (ПЦР-РВ).

Оценку инфекционного титра вируса краснухи (штамм Wistar RA 27/3), культивируемого на клетках Vero, проводили параллельно методами ПЦР-РВ и в реакции цитопатического действия (ЦПД) на культуре клеток RK-13. Результаты, полученные в обоих методах, сравнивали.

Интервал времени после заражения, в котором разница между значениями титра вируса, полученными двумя методами, не превышала 0,3 lg ТЦД50/мл (величина, допустимая ВОЗ), составил от 2 до 7 суток. Коэффициент корреляции Пирсона между значениями для данного временного интервала был близок к 1, что указывает на хорошее совпадение результатов. В контрольном образце – международном вакцинном стандарте вируса краснухи – разница между величиной титра вируса, определенная методами ПЦР-РВ и ЦПД, находилась в пределах 0,2 lg ТЦД50/мл, что меньше допустимой ВОЗ величины.

Разработан метод оценки титра вируса краснухи в вируссодержащей жидкости с помощью ПЦР-РВ, обеспечивающий высокую специфичность, чувствительность, стандартность, меньшую длительность проведения процедуры в сравнении с классическими методами и, в то же время, высокую корреляцию результатов с ними на определенном временном интервале. (См. статью: Забияка Ю.И. с соавт. "Экспресс-метод оценки титра вируса краснухи в вируссодержащей жидкости с помощью ПЦР-РВ").

"Журн.микробиол.", 2010, № 5, с. 57 - 62.

Все новости

ФБУН НИИ эпидемиологии
и микробиологии имени Пастера
Отдел новых технологий