Создание иммунохимических реагентов для выявления CagA-антигена Helicobacter pylori и антител против него

Инфекция бактерией Helicobacter pylori вызывает развитие в слизистой желудка воспалительного процесса, который в большинстве случаев протекает в форме хронического гастрита. В ряде случаев (до 20%) инфекция приводит к возникновению острого гастрита, язвенной болезни, аденокарциномы желудка и MALT-лимфомы. Наиболее выраженные патологические процессы, сопряженные с повышенной вероятностью опухолевой трансформации, вызывают штаммы H.pylori, экспрессирующие цитотоксин CagA.

До сих пор остаются неизученными свойства CagA-белка как антигена: не выяснена иммуногенность различных эпитопов молекулы, не исследован изотипический спектр антител, вырабатываемых против этого белка.

По заключению ряда экспертов, в том числе III Маастрихтской конференции, для диагностики инфекции H.pylori рекомендуется использовать комплекс иммунологических и молекулярно-биологических методов. Поскольку CagA-белок является маркером высокопатогенных штаммов H.pylori, разработка методов иммунодетекции CagA-антигена и антител против него представляется актуальной проблемой клинической иммунологии. Решение этой проблемы сдерживается отсутствием стандартизованных препаратов антигена CagA и моноклональных антител (МКАТ) против него. До сих пор не существует эффективной технологии выделения и очистки белка CagA из культур H.pylori, что препятствует получению и аттестации МКАТ против этого антигена.

Цель работы состояла в создании иммунохимических реагентов – антигенов и моноклональных антител – для выявления Cag A-белка H.pylori и антител против него.

На основании in silico анализа в молекуле цитотоксина CagA выделено три качественно различные области, из которых N-концевая высоко консервативна и низкоиммуногенна, центральная – консервативна и обладает высокой иммуногенностью, а С-концевая характеризуется высокой вариабельностью и низкой иммуногенностью.

Сконструированы четыре штамма Escherichia coli, продуцирующие рекомбинантные фрагменты белка CagA. Фрагменты воспроизводят структуру высоко- и низкоиммуногенных областей молекулы CagA и в совокупности представляют всю аминокислотную последовательность белка. Рекомбинантные фрагменты CagA позволяют выявлять сывороточные антитела против цитотоксина, исследовать их изотипический состав и специфичность в отношении различных участков молекулы белка CagA. Впервые созданы штаммы гибридом-подуцентов моноклональных антител против высоко- и против низкоиммуногенных участков молекулы CagA. Моноклональные антитела распознают четыре изолированных линейных эпитопа и реагируют как с рекомбинантными полипептидами, так и с нативным белком CagA H.pylori. Моноклональные антитела (1Н1, 1Н11 и 3Н7) позволяют дифференцировать CagA-позитивные и CagA-негативные штаммы H.pylori методом иммуноблоттинга. Антитела 1Н11 и 3Н7 составляют комплементарную пару для определения белка CagA методом двухцентрового иммуноферментного анализа. (См. диссертацию “Создание иммунохимических реагентов для выявления CagA-антигена Helicobacter pylori и антител против него”).

Климович А.В. Автореф. дис. канд. биол. наук. СПб, 2010.

Все новости

ФБУН НИИ эпидемиологии
и микробиологии имени Пастера
Отдел новых технологий