Разработка конкурентного иммуноферментного анализа для выявления антител к вирусам гриппа А(Н5)

При исследованиях, связанных с гриппом, серологические методы используют для диагностики, оценки иммуногенности вакцин и наблюдения за популяционным иммунитетом. Наиболее широко применяемым серологическим тестом выявления противогриппозных антител (АТ) является реакция торможения гемагглютинации (РТГА), поскольку этот метод штаммоспецифичен и прост в исполнении. Вместе с тем он имеет ограничения. Так, в традиционной постановке с использованием эритроцитов кур или индейки РТГА проявила низкую чувствительность при детекции АТ к гемагглютинину (НА) вирусов гриппа А(H5N1) у людей. Некоторое повышение чувствительности было достигнуто при использовании в качестве индикаторной системы эритроцитов лошади. В последние годы внимание исследователей повысилось к реакции нейтрализации, которая, как известно, является наиболее чувствительным серологическим методом и отражает протективную функцию противовирусных АТ. Действительно этот метод оказался вполне адекватным при оценке иммуногенности новых Н5-вакцин. Однако он достаточно сложен в исполнении и предполагает использование живого вируса.

Цель работы – исследование диагностических возможностей иммуноферментного анализа (ИФА) при выявлении АТ, специфичных к вирусу гриппа А(H5N1).

Показано, что вариант непрямого ИФА с использованием очищенной фракции поверхностных вирусных гликопротеинов (ГП) в качестве антигена для сенсибилизации твердой фазы не является специфичным методом для дифференциальной детекции АТ к вирусу гриппа А(Н5) (Н5-АТ) из-за общих консервативных эпитопов в структуре ГП вирусов А(Н5) и A(H1N1). Доказательством наличия общих иммунодоминантных детерминант в структуре НА вируса гриппа H1 и Н5 являлась перекрестная активность некоторых моноклональных антител (МКА) к вирусам А(Н5) и A(H1N1), полученных в НИИ гриппа. В связи с этим для субтипоспецифичной детекции Н5-АТ был предложен дизайн постановки ИФА, который основан на конкуренции МКА, специфичных к НА вируса А(Н5), с Н5-АТ в исследуемых сыворотках за связь с вирусом гриппа А(Н5). При сравнении результатов конкурентного ИФА (к-ИФА), реакции микронейтрализации (МН) и РТГА (с использованием эритроцитов лошади) при исследовании сывороток крови, которые получены в динамике от 44 волонтеров, привитых инактивированной вакциной из вируса гриппа A/Indonesia/ 5/2005 (H5N1), отметили высокую чувствительность и специфичность к-ИФА при выявлении Н5-специфичных AT. Эффективность выявления в к-ИФА сывороток, строго положительных по содержанию Н5-AT, приближалась к таковой при реакции МН и была на 9—34% выше, чем при РТГА (в зависимости от используемых при анализе Н5-вирусных антигенов). Метод к-ИФА может быть предложен для оценки новых гриппозных вакцин в качестве дополнительного лабораторного теста. Поскольку при проведении к-ИФА не используется инфекционный вирус, он может быть рекомендован для серодиагностики гриппа А(Н5) в практических вирусологических лабораториях. (См. статью: Кривицкая В.З. с соавт. "Разработка конкурентного иммуноферментного анализа для выявления антител к вирусам гриппа А(Н5)").

"Клин. лаб. диагностика", 2010, № 10, с. 32 - 35.

Все новости

ФБУН НИИ эпидемиологии
и микробиологии имени Пастера
Отдел новых технологий