Сравнительная оценка методов дот-иммуноанализа и иммунохроматографии при выявлении холерных вибрионов О1 серогруппы

В многочисленных публикациях и практических документах по холере постоянно отмечается необходимость продолжения исследований в направлении разработки новых методов диагностики и новых диагностических препаратов, таких как генодиагностика, биочипы, ИФА, иммунохроматография, и определения их места в схеме лабораторной диагностики холеры. Но создание биочипов, экспресс-вариантов ИФА, иммунохроматографических полосок предполагает использование высокоспецифичных и высокоаффинных стандартных антител. У нас же в настоящее время для идентификации и дифференциации холерных вибрионов О1 регламентировано использование диагностических антител лошадиного происхождения и для Vibrio cholerae О139 – кроличьих антител в соответствии с МУК 4.2.2218-07 "Лабораторная диагностика холеры". Поэтому и предусмотрена постановка развернутой реакции агглютинации как следствие неспецифичности лошадиных сывороток. Это занимает дополнительное время и требует дополнительных экономических затрат. Очевидно также и то, что чем качественнее диагностические препараты, тем уже их спектр и менее затратны исследования на холеру. Альтернатива лошадиным сывороткам на сегодняшний день – это кроличьи сыворотки и моноклональные антитела (МКА) – продукт биотехнологических приемов. На основе этих антител и предпринимаются попытки исследователей совершенствовать или создать новые диагностические препараты.

Цель работы – сравнительная оценка чувствительности и специфичности иммунохроматографической (ИХ) тест-системы и дот-иммуноанализа для определения возможности их использования в лабораторной диагностике холеры.

Экспериментальные серии ИХ тест-системы и дот-иммуноанализа (ДИА) для обнаружения холерных вибрионов О1 серогруппы сероваров Огава и Инаба сконструированы на основе видоспецифических МКА, конъюгированных с коллоидным золотом (ИХ) и пероксидазой (ДИА). Гибридома-продуцент МКА получена и хранится в азоте в РостНИПЧИ. Депонирована в специализированной коллекции клеточных культур позвоночных Института цитологии (Санкт-Петербург).

Установлена строгая специфичность ИХ тест-системы и ДИА в отношении холерных вибрионов О1 серогруппы при отсутствии перекрестной реактивности с представителями близкородственных и гетерологичных микроорганизмов. Минимальное количество вибрионов, которое можно выявить с помощью ИХ тест-системы, равняется 107 м.к., для ДИА этот показатель составляет 105-106 м.к. Постановка ИХ тест-системы осуществляется в течение 5-15 минут, прямого ДИА – 1,5 часа, позволяет визуально оценить реакцию, не требует приборного оснащения, и в перспективе оба метода могут найти применение на определенных этапах схемы лабораторного анализа на холеру. (См. статью: Алексеева Л.П. с соавт. "Сравнительная оценка методов дот-иммуноанализа и иммунохроматографии при выявлении холерных вибрионов О1 серогруппы").

"Журн. микробиол.", 2010, № 6, с. 88 - 93.

Все новости

ФБУН НИИ эпидемиологии
и микробиологии имени Пастера
Отдел новых технологий