Результаты применения метода полимеразной цепной реакции для лабораторного подтверждения иксодовых клещевых боррелиозов

В лесной зоне Прикамья, преимущественно в южно-таежных и хвойно-широколиственных лесах, широко распространены очаги иксодовых клещевых боррелиозов (ИКБ). Заражение обусловлено Borrelia garinii и Borrelia afzelii.

Значительное увеличение числа выявляемых случаев ИКБ в Пермском крае, подтверждающее экспертный прогноз в отношении истинных показателей заболеваемости в этом регионе, во многом связано с совершенствованием методов лабораторной диагностики. Их условно можно подразделить на непрямые – серологические тесты (ИФА (иммуноферментный анализ), РНИФ (реакция непрямой иммунофлюоресценции), иммунный блоттинг) и прямые – направленные на детекцию возбудителя, его антигенов или ДНК (культуральный метод, прямая микроскопия и ПЦР).

В США и Европе при экспресс-диагностике ИКБ для ИФА сыворо-ток крови пациентов широко применяют рекомбинантные антигены (синтетические пептиды). Зачастую после ИФА используют иммуноблоттинг. Эти методы обладают высокой специфичностью и чувствительностью. Однако, несмотря на все достоинства серологических исследований, ни одна из известных реакций не позволяет эффективно выявлять антитела на всех этапах иммуногенеза. Позднее появление специфических иммуноглобулинов М и G, а также разная выраженность антительного ответа у больных обусловливают трудность ранней диагностики инфекции. Микроскопические тесты часто не дают возможности обнаружить боррелии из-за их низкой концентрации в исследуемом материале. Культуральный метод, который считается «золотым стандартом» диа-гностики, в некоторых случаях применяется для подтверждения ИКБ, но не может рассматриваться как способ экспресс-диагностики: показатель частоты изоляции невысок, а рост боррелий в посевах требует длительного времени.

В этой связи значимыми преимуществами для подтверждения ИКБ обладает один из наиболее широко используемых тестов молекулярной диагностики – полимеразная цепная реакция. Она позволяет не только осуществлять детекцию ДНК боррелий в острый период заболевания, но и идентифицировать возбудителей до геновидов, а также осуществлять диагностику микст-инфекций.

Проведена диагностика ИКБ с помощью ПЦР у 251 пациента, находившегося на лечении в краевой инфекционной больнице г. Перми в весенне-летний период 2007 года с острыми лихорадочными заболеваниями после присасывания клещей. Исследованы 634 пробы крови методом «nested» ПЦР с родоспецифичными праймерами Borrelia burgdorferi sensu lato (Bb23SN1 – Bb23SC1 и IGSb1 – IGSa2), фланкирующими участок 5S-23S rРНК-спейсера, в динамике заболевания. Определены оптимальные сроки (8-14 день от начала заболевания) детекции ДНК боррелий в крови пациентов. Установление диагноза ИКБ с помощью ПЦР у 57,5% пациентов с эритемной и безэритемной формами позволяет использовать этот метод в качестве дополнительного в лабораторной диагностике заболевания. (См. статью: Тетерин В.Ю. с соавт. "Результаты применения метода полимеразной цепной реакции для лабораторного подтверждения иксодовых клещевых боррелиозов").

"Эпидемиология и вакцинопрофилактика", 2010, № 5 (54), с. 35 - 40.

Все новости

ФБУН НИИ эпидемиологии
и микробиологии имени Пастера
Отдел новых технологий