Моноклональные антитела к гликопротеину Е1 вируса краснухи

Клиническая диагностика краснухи, как и других экзантемных заболеваний, протекающих с лихорадкой у детей и взрослых, требует лабораторного подтверждения инфекции. Прямое выделение вируса из клинического материала путем заражения культур клеток RK 13, Vero, Sirk (клетки роговицы кролика, первичной культуры клеток человека) сложно, трудоемко и может успешно проводиться только в хорошо оснащенных вирусологических лабораториях. Появившиеся в последнее время методы выявления РНК вируса краснухи, основанные на амплификации нуклеиновых кислот, применяются чаще всего для диагностики сложных и сомнительных случаев заболевания, а также для выявления инфицирования плода и новорожденных. Широко применяют в лабораторной диагностике и серологические методы. В ответ на инфекцию в организме человека начинается синтез иммуноглобулинов М, направленных преимущественно к поверхностному гликопротеину Е1 вириона краснухи. Далее происходит переключение иммунной системы на синтез иммуноглобулинов классов G и А. Сывороточные IgA направлены исключительно против капсидного белка вируса С, тогда как IgG человека продуцируется к трем вирусным белкам С, Е1, Е2.

Эффективность и скорость идентификации вирусов увеличиваются при сочетанном использовании культурального метода с иммунологическими.

Цель работы – получение моноклональных антител (МКА) к гликопротену Е1 вируса краснухи, оценка иммунохимических свойств и возможности использования флуоресцирующих МКА для быстрой идентификации вируса краснухи.

Использованы штаммы вируса краснухи С-74 (Москва), вакцинные штаммы "Орлов" (Санкт-Петербург), Wistar Ra 27/3 (США), а также штамм Judith (Германия). Вирусные антигены получали, применяя диплоидные клетки Л-68 и клеточные линии ВНК-21-F и Vero E6. МКА получали общепринятым методом и определяли их изотоп. Проводили иммуноблоттинг, ИФА, РТГА и реакцию иммунофлуоресценции.

Получено 5 МКА: Кх-252.1, Кх-347.2, Кх-183.3, Кх-214.4, Кх-187.5 к антигенам штамма С-74 вируса краснухи. Определен изотип полученных МКА и охарактеризована их иммунореактивность с нативными и денатурированными антигенами других штаммов: "Орлов", Wistar Ra 27/3, Judith. По данным ИФА все МКА имели высокие титры взаимодействия с гликопротеином Е1 вируса краснухи от 1/1600 до 1/200000. По данным иммуноблоттинга – только 4 МКА (Кх-252.1, Кх-347.2, Кх-183.3, Кх-214.4). В РТГА МКА ингибировали гемагглютинирующую активность штамма Judith в титре от 1/16 до 1/1024. ФИТЦ конъюгат МКА Кх-347.2 (наиболее чувствительный вариант) позволяет выявлять антиген вируса краснухи в инфицированных клетках Vero E6 через 24 часа с момента инфицирования, а ФИТЦ конъюгаты трех МКА (Кх-183.3, Кх-214.4, Кх-187.5) – через 72 часа. Перспективно использовать ФИТЦ конъюгаты МКА для индикации гликопротеина Е1 вируса краснухи в инфицированных клеточных культурах и назофарингеальных мазках. (См. статью: Нагиева Ф.Г. с соавт. "Моноклональные антитела к гликопротеину Е1 вируса краснухи").

"Журн. микробиол.", 2011, № 1, с. 61 - 67.

Все новости

ФБУН НИИ эпидемиологии
и микробиологии имени Пастера
Отдел новых технологий