Разработка высокочувствительного устойчивого к нуклеотидным несовпадениям ПЦР-теста для качественного и количественного определения РНК ВИЧ-1

По данным 2008 г., количество людей, инфицированных вирусом иммунодефицита человека (ВИЧ-1), во всем мире составило 33 миллиона, и в настоящее время оно продолжает расти. Поэтому одной из актуальных задач здравоохранения всех стран по предотвращению дальнейшего распространения ВИЧ-инфекции является повышение эффективности ее диагностики. Сейчас в дополнение к стандартным иммуноферментным методам диагностики в развитых странах Запада широко используют полимеразную цепную реакцию (ПЦР). Ее применение в донорской службе позволило снизить риск гемотрансфузионной передачи ВИЧ в 2-3 раза за счет сокращения сероконверсионного окна до 11 дней. С недавнего времени обязательное тестирование донорской крови на ВИЧ с использованием ПЦР введено и в России (приказ Минздравсоцразвития России №261н от 06.06.08). Также данный метод используют для обнаружения вируса у детей первого года жизни, рожденных от ВИЧ-инфицированных матерей. Количественный вариант ПЦР незаменим при оценке вирусной нагрузки у ВИЧ-инфицированных для назначения им антиретровирусной терапии и мониторинга ее эффективности.

Особую проблему для диагностики ВИЧ-инфекции создает высокая генетическая вариабельность вируса. Выделены 3 эволюционно независимые генетические группы ВИЧ-1: М, N и О. Группы N и О встречаются крайне редко, в России случаев заражения ВИЧ-1 групп N или О на данный момент не зарегистрировано. Основной вклад в мировую эпидемию СПИДа вносят штаммы ВИЧ-1 группы М, которые подразделяются на 9 субтипов (от А до К) и множество рекомбинантных форм. Распространенность того или иного субтипа варьирует в разных географических регионах.

На основе метода ПЦР с флуоресцентной детекцией в режиме реального времени был разработан пригодный для применения в клинической практике набор "РеалБест РНК ВИЧ" для обнаружения РНК ВИЧ-1 и определения вирусной нагрузки в образцах плазмы или сыворотки крови. Благодаря выбору высококонсевативного района генома, а также проведенному экспериментальному исследованию влияния на ПЦР различных мисматчей (нуклеотидные несовпадения) в комплексах праймер-матрица и зонд-матрица с последующим подбором оптимальной композиции олигонуклеотидов разработанный тест позволяет выявлять и измерять концентрацию всех субтипов ВИЧ-1 группы М. Набор обеспечивает высокую воспроизводимость и чувствительность анализа и широкий динамический диапазон измерения вирусных нагрузок (от 20 до 107 МЕ/мл сыворотки или плазмы крови). (См. статью: Прасолова М.А. с соавт. "Разработка высокочувствительного устойчивого к нуклеотидным несовпадениям ПЦР-теста для качественного и количественного определения РНК ВИЧ-1").

"Вопр. вирусол.", 2011, № 1, с. 24 - 29.

Все новости

ФБУН НИИ эпидемиологии
и микробиологии имени Пастера
Отдел новых технологий