Биотехнологические основы диагностики вирусных и бактериальных инфекций

Цель исследования: разработка наборов и тест-систем, основанных на определении клеточного и гуморального иммунного ответа на антигены вирусного гепатита А, туберкулеза легких и вируса лейкоза крупного рогатого скота для выявления этих заболеваний у человека и животных.

Разработана диагностическая тест-система «Вектогеп-А-IgM» для выявления антител класса М к вирусу гепатита А методом ИФА. По аналитическим характеристикам (чувствительности – 98-97%, специфичности – 100%, времени проведения анализа – 2-2,5 ч) тест-система сопоставима с тест-системами зарубежных фирм Abbott (США) и La Roche (Швейцария). Тест-система по результатам проведения Госиспытаний, рекомендована Ученым советом ГИСК имени Л.А.Тарасевича и Комитетом по производству иммунобиологических препаратов (МИБП) к регистрации. Разработан набор компонентов «Вектогеп-А-антитела» для выявления IgG-антител к вирусу гепатита А с чувствительностью и специфичностью соответственно 98-99% и 82%. Аналитическая чувствительность диагностического набора составила 9,8 ± 1,2 мМЕ/мл, при этом чувствительность референс-тест-системы «ИФА-анти-ВГА» составила 11,8 ± 1,6 мМЕ/мл.

Получены рекомбинантные штаммы Escherichia coli – продуценты химерных белков rESAT-6, rCFP10 и rΔMPT64 Mycobacterium tuberculosis, которые депонированы в коллекции культур микроорганизмов ГНЦ ВБ «Вектор». Предложена технологическая схема для наработки и очистки рекомбинантных белков rESAT-6, rCFP10 и rΔMPT64 в растворимой форме. На примере rESAT-6 и rCFP10 установлено, что с использованием рекомбинантных белков возможно выявлять антитела классов G, A и M среди разных групп обследуемых, но наиболее высокий показатель выявляемости иммуноглобулинов определен для антител класса G, который составил 70% (для IgA – 31,4%, IgM – 11,8%). Чувствительность и специфичность выявления IgG-антител методом иммуноферментного анализа к рекомбинантным антигенам rESAT-6, rCFP10 и rΔMPT64, оцененные по образцам сывороток от больных туберкулезом и здоровых доноров, составила 79%, 65%, 81% и 92-98%, 95-98% и 76% соответственно.

Чувствительность функционального анализа при выявлении маркеров Т-клеточного иммунного ответа (IFN-y), определявшаяся при стимуляции мононуклеаров цельной крови рекомбинантными белками, rESAT-6, rCFP10 и rΔMPT64 составила 84-100%. 80-95%, 60-78% соответственно, специфичность – 86-100%, 82-100% и 76-97% соответственно. При использовании пула одновременно трех рекомбинантных белков – rESAT-6, rCFP10 и rΔMPT64 – специфичность составила 96,2%, а чувствительность – 89,1%. Разработаны диагностические компоненты наборов, позволяющие эффективно оценивать состояние клеточного иммунитета при туберкулезной инфекции. (См. диссертацию "Биотехнологические основы диагностики вирусных и бактериальных инфекций человека и животных").

Туманов Ю.В. Автореф. дис. докт. биол. наук. Кольцово, 2011.

Все новости

ФБУН НИИ эпидемиологии
и микробиологии имени Пастера
Отдел новых технологий