Первый опыт применения метода ПЦР в режиме реального времени для диагностики бактериемии в послеоперационном периоде у кардиохирургических больных

Классические микробиологические методы, какими бы совершенными они ни были, ограничены законами физиологии микроорганизмов, требующих определенного времени для роста. При использовании культурального метода, остающегося в настоящее время золотым стандартом диагностики инфекций кровотока, требуется не менее 24-48 часов после взятия пробы крови на исследование для выделения возбудителя, его идентификации и получения антибиотикограммы. Отрицательный результат выдается не ранее чем через 5-7 суток, при этом тяжело больной может просто не дождаться ответа из лаборатории. Методы молекулярной диагностики, основанные на технологии полимеразной цепной реакции (ПЦР), не подразумевают культивирования бактерий, что позволяет значительно сократить временной интервал между взятием образца крови больного и определением вида возбудителя по сравнению с традиционными микробиологическими методами, реализация которых, как было отмечено, может занимать несколько суток. При этом спектр детектируемых возбудителей охватывает порядка 90% клинически значимых микроорганизмов.

Сопоставлены результаты, полученные методом ПЦР в режиме реального времени, с данными культурального метода исследования крови у больных с подозрением на бактериемию в раннем послеоперационном периоде.

В период с сентября по декабрь 2009 г. исследовано 43 образца крови от 37 взрослых пациентов (возраст 59 ± 9,2 года) с подозрением на бактериемию. Параллельно с посевом брали пробы крови для ПЦР-анализа (метод SeptiFast) (Roche Diagnostics, Швейцария).

Среди 43 образцов 20 (46,5%) оказались положительными. Видовой состав идентифицированных микроорганизмов: Enterococcus faecalis – 2, Klebsiella pneumoniae – 2, Enterococcus faecium – 1, Pseudomonas aeruginisa – 2, коагулазонегативные стафилококки (CNS) – 11, прочие – 2. Все случаи высева CNS были интерпретированы методом ПЦР как отрицательные или как контаминация. В четырех случаях получено полное совпадение результатов сравниваемых методов. Среди случаев, когда гемокультура была отрицательной (n=23), метод ПЦР позволил выявить два положительных результата (Staphylococcus spp. и Stenotrophomonas maltophilia). В трех случаях при положительной гемокультуре метод ПЦР дал отрицательный результат, причем в двух из них возбудители (Pseudomonas fluorescens и Ralstonia mannitolilytica) не входили в спектр детектируемых данным методом патогенов. В двух случаях результаты, полученные сравниваемыми методами, различались.

Метод ПЦР-диагностики в режиме реального времени позволяет существенно сократить время идентификации патогена, а также выявить ложноположительные результаты, обусловленные контаминацией. Данный метод должен применяться параллельно с культуральным, так как только при этом можно получить необходимые в клинике данные о чувствительности возбудителя к антимикробным препаратам. (См. статью: Попов Д.А., Вострикова Т.Ю. "Первый опыт применения метода ПЦР в режиме реального времени для диагностики бактериемии в послеоперационном периоде у кардиохирургических больных").

"Клин. лаб. диагностика", 2011, № 8, с. 49 - 52.

Все новости

ФБУН НИИ эпидемиологии
и микробиологии имени Пастера
Отдел новых технологий