Разработка ПЦР-тест системы на основе гена colA для выявления лептоспир в клиническом материале

Лептоспироз – инфекционное заболевание, тяжело протекающее у человека и поражающее млекопитающих некоторых видов, в том числе домашних и сельскохозяйственных животных. В настоящее время основным методом диагностики лептоспироза остается реакция микроагглютинации (РМА), для постановки которой необходимы живые культуры референс-штаммов патогенных лептоспир, что обусловливает ее трудоемкость. Выявляемые в РМА антитела к лептоспирам могут длительно сохраняться после перенесенного заболевания или вакцинации. Это усложняет интерпретацию результата при исследовании сывороток животных, вакцинация которых против лептоспироза проводится в обязательном порядке. Абсолютное доказательство лептоспирозной этиологии заболевания – обнаружение возбудителя в организме хозяина. Применяемые для этой цели микробиологические методы исследования тоже имеют ряд недостатков, таких как низкая чувствительность микроскопии и длительность проведения бактериологического исследования (лептоспиры медленно растут на питательных средах). Недостатки как РМА, так и других методов лабораторной диагностики обосновывают целесообразность разработки диагностических систем для выявления возбудителя в организме хозяина, основанных на молекулярно-биологических методах. ПЦР позволяет выявлять лептоспиры как в сыворотке, так и в моче, однако возбудитель присутствует в крови только в первые дни заболевания. Для адекватной диагностики и контроля эффективности лечения лептоспироза у людей и животных необходимо выявление возбудителя в моче в более поздние сроки инфекционного процесса. Особенно важна детекция лептоспир в моче домашних животных, в частности собак, которые могут оставаться носителями лептоспир длительное время после заражения.

Цель работы – создание праймеров, обеспечивающих обнаружение лептоспир в клиническом материале, прежде всего в моче, и проверка их чувствительности и специфичности.

Проведено исследование чувствительности и специфичности праймеров, комплементарных гену colA, в стандартной ПЦР с использованием препаратов ДНК культур патогенных и сапрофитных лептоспир, биологического материала от здоровых людей и собак, в том числе контаминированного культурой патогенных лептоспир.

Было установлено специфическое взаимодействие данных праймеров с ДНК патогенных лептоспир 14 серогрупп. Чувствительность методики составила 50 клеток на 1 мл образца.

Описанные праймеры удовлетворяют требованиям чувствительности и специфичности и могут быть рекомендованы для применения с целью детекции лептоспир как в сыворотке, так и в моче. (См. статью: Ваганова А.Н. с соавт. "Разработка ПЦР-тест системы на основе гена colA для выявления лептоспир в клиническом материале").

"Журн.микробиол.", 2011, № 5, с. 67 - 71.

Все новости

ФБУН НИИ эпидемиологии
и микробиологии имени Пастера
Отдел новых технологий