Оптимизация условий адсорбции моноклональных антител на твердую фазу в сэндвич-методе определения вирусных антигенов

Твердофазный иммуноферментный сэндвич-метод определения антигенов белковой природы находит широкое применение для выявления маркеров опасных вирусных инфекций. Традиционная схема указанного варианта иммуноферментного анализа (ИФА) основана на реакции моноклональных антител (МКА), иммобилизованных на твердой фазе, с антигеном в растворе и вторыми антителами, связанными с ферментной меткой (пероксидазой хрена или другими). Иммобилизованные и меченые МКА направлены к разным эпитопам определяемого антигена. Это позволяет образоваться на поверхности твердой фазы трехслойным иммунным комплексам ("сэндвичам"), в которых антиген зажат между двумя антителами. Путем проведения реакции фермента с субстратом ферментная метка "трансформируется" в соответствующий сигнал, регистрируемый различными физико-химическими методами (спектрофотометрическими и другими). Интенсивность регистрируемого сигнала зависит от концентрации аналита.

Поверхностная концентрация биологически активных и высокоаффинных МКА на твердой фазе (например, на поверхности полистироловых планшетов) – это один из основных факторов, определяющих эффективность твердофазных иммуноферментных диагностических систем. Для прикрепления МКА к твердой фазе нередко используют метод пассивной адсорбции. Этот подход отличает доступность, простота исполнения и дешевизна. Однако его недостатком является то, что при соприкосновении с пластиком (твердой фазой) более 95-97% адсорбированных МКА утрачивают свою антигенсвязывающую активность в результате денатурации или неправильной ориентации молекул. Поэтому поиск методов оптимизации пассивной адсорбции МКА на твердую фазу остается актуальной задачей.

В настоящей статье показано, что более 30% моноклональных антител существенно лучше сохраняют свою активность после адсорбции на полистироловые поверхности при рН 2,8, чем при рН 7,5 или 9,5. Использование буферов с низким значением рН для адсорбции антител может быть использовано в качестве полезного приема при конструировании и оптимизации иммуноферментных сэндвич-методов определения вирусных антигенов. (См. статью: Яковлева Д.А. с соавт. "Оптимизация условий адсорбции моноклональных антител на твердую фазу в сэндвич-методе определения вирусных антигенов").

"Здоровье населения и среда обитания", 2012, № 3, с. 20 - 24.

Все новости

ФБУН НИИ эпидемиологии
и микробиологии имени Пастера
Отдел новых технологий