Разработка ДНК-биочипа для выявления субтипов вируса гриппа А

Для своевременного реагирования и введения мероприятий, препятствующих быстрому распространению высокопатогенных вариантов вируса гриппа птиц и пандемического вируса гриппа А/H1N1(2009), в настоящее время остро встал вопрос о дифференциальной диагностике вируса гриппа и его субтипировании.

Основными методами субтипирования в настоящее время являются серологические (реакция торможения гемагглютинации – РТГА), а также методы на основе полимеразной цепной реакции (ПЦР). Однако вследствие высокой скорости изменчивости поверхностных гликопротеинов гемагглютинина (НА) и нейраминидазы (NA) могут возникать трудности в субтипировании. По этой причине актуально использовать дополнительные методы диагностики, а также их комбинации для получения достоверного результата.

В настоящий момент детекция на основе ДНК-биочипа является одним из альтернативных методов дифференциальной диагностики вируса гриппа, так как этот метод позволяет совместить производительность метода амплификации нуклеиновых кислот и широкие возможности скрининга с помощью микрочипа. Ранее в литературе описывались попытки создать на основе ДНК-биочипов систему для детекции и субтипирования вируса гриппа.

Целью работы явилась оригинальная разработка ДНК-биочипа, выявляющего 6 субтипов (Н1, в том числе H1sw пандемического вируса гриппа А/H1N1(2009), H2, H3, H5, H7, H9) гемагглютинина и 3 субтипа (N1, N2, N3) нейраминидазы для дифференциальной диагностики данных субтипов вируса гриппа типа А.

Был разработан ДНК-биочип, выявляющий сезонные штаммы вируса гриппа H1N1 и H3N2 субтипов, высокопатогенный вирус гриппа птиц субтипа H5N1 и пандемический вариант вируса гриппа субтипа H1N1(2009). Преимуществом используемого микрочипа является одновременное субтипирование анализируемого изолята вируса гриппа со всеми возможными зондами, специфическими для каждого субтипа гемагглютинина и нейраминидазы. Показана принципиальная возможность использования для диагностики и субтипирования высокопатогенного вируса гриппа птиц А/H5N1, пандемического вируса гриппа А/H1N1(2009), сезонных вирусов гриппа А/H1N1 и А/H3N2 ДНК-биочипа. Наличие специфических зондов для Н7и Н9-субтипов вируса гриппа потенциально позволяет разработанному микрочипу выявлять и эти субтипы. Очевидна необходимость оценки чувствительности полученного метода в последующей работе. При дальнейшем усовершенствовании данная разработка является перспективной как дополнительный, альтернативный метод субтипирования вируса гриппа типа А. Также этот метод имеет перспективы для использования его в практике. (См. статью: Шиков А.Н. с соавт. “Разработка ДНК-биочипа для выявления субтипов вируса гриппа А”).
"Пробл. особо опасных инф.", 2012, № 2, с. 89 - 93.

Все новости

ФБУН НИИ эпидемиологии
и микробиологии имени Пастера
Отдел новых технологий