Материалы и методы

Культуры микроорганизмов

Были изучены 46 изолятов Mycoplasma hominis и 31 изолят Ureaplasma spp., поступивших в Городской Консультативно-Диагностический Центр при больнице им. Боткина, г. Санкт- Петербург, свежевыделенных из клинического материала пациентов (семенной жидкости, секрета предстательной железы, центрифугата мочи, соскобов со слизистой оболочки уретры, цервикального канала, влагалища).

Антибиотики

Чувствительность M. hominis и Ureaplasma spp. определяли к девятнадцати антимикробным препаратам различных групп: тетрациклинам (тетрациклин и доксициклин), макролидам (эритромицин, кларитромицин, рокситромицин, азитромицин, джозамицин, мидекамицин и спирамицин), фторхинолонам (офлоксацин, ципрофлоксацин, пефлоксацин, спарфлоксацин, левофлоксацин, моксифлоксацин и ломефлоксацин), линкозамидам (клиндамицин и линкомицин), аминогликозидам (гентамицин).

Метод серийных разведений в жидкой среде

Определение МПК проводили методом серийных разведений в жидкой питательной среде. Этот метод основывается на последовательном двукратном разведении антибиотиков в жидкой питательной среде МИКОПЛАЗМА-50 для выявления M. hominis (ФСР 2009/05983) и УРЕАПЛАЗМА-50 - для Ureaplasma spp. (ФСР 2009/05984), производства ФБУН НИИ эпидемиологии и микробиологии им. Пастера, в лунках планшетов.

Жидкая питательная среда МИКОПЛАЗМА-50 приготовлена на основе PPLO-бульона, с добавлением 10 % лошадиной сыворотки, 10 % дрожжевого экстракта, 1 % аргинина. В качестве индикатора используется феноловый красный в смеси с бриллиантовым синим. рН питательной среды 6,95.

Жидкая питательная среда УРЕАПЛАЗМА-50 приготовлена на основе плацентарного бульона, с добавлением 20 % лошадиной сыворотки, 10 % дрожжевого экстракта, 0,01 % мочевины. В качестве индикатора также используется феноловый красный. рН питательной среды 6,0.

Для селективности этих питательных сред было предусмотрено добавление смеси антибиотиков, которые подавляли постороннюю микрофлору.

Определение МПК

Инокулы каждого штамма, полученные после первого посева, были внесены в объеме 100 мкл в каждую лунку планшета с сорбированными антибиотиками и инкубировались анаэробно при температуре 37 °С с добавлением 75 мкл стерильного вазелинового масла. Инокулы готовились в пределах титра 104 - 105 КОЕ/мл. Диапозон двукратных разведений антибиотиков, сорбированных на планшетах, располагался в интервале концентраций 64 - 0,06 мкг/мл.

Отсутствие роста микроорганизма на среде с концентрацией исследуемого препарата 2 мкг/мл и меньше расценивали как высокую чувствительность к нему, 4 мкг/мл – как умеренную, 8 мкг/мл и больше – как наличие резистентности к препарату.

Выбрать другой раздел данной публикации
Все публикации

ФБУН НИИ эпидемиологии
и микробиологии имени Пастера
Отдел новых технологий