Набор реагентов для определения чувствительности Trichomonas vaginalis к антипротозойным препаратам (СВТ-АЧ). Комплект № 1

Назначение

Набор СВТ-АЧ предназначен для определения чувствительности Trichomonas vaginalis к антипротозойным препаратам, назначаемым при лечении урогенитального трихомоноза. Комплект рассчитан на проведение 10 анализов определения чувствительности T.vaginalis к семи препаратам (метронидазол, тинидазол, ниморазол, секнидазол, орнидазол, клотримазол, нифуратель).

Комплект позволяет оценить исследуемые штаммы T.vaginalis как чувствительные или резистентные к семи антипротозойным препаратам.

Принцип метода

Принцип метода заключается в обнаружении подавления роста после культивирования исследуемого штамма T. vaginalis в тех лунках 8 луночного стрипа с селективной питательной средой, в которых содержится препарат, обладающий антипротозойными свойствами. Наличие или подавление роста штамма возбудителя проводится микроскопическим методом с помощью специальной гребенки, позволяющей проводить одновременную визуализацию во всех 8 лунках, одна из которых не содержит антипротозойных препаратов и служит положительным контролем.

Состав набора

• 8-луночные стрипы с антипротозойными препаратами - 10 шт.
• Питательная среда для обнаружения T.vaginalis, лиофилизированная - 10 фл.
• Устройство для микробиологических исследований (гребенка) - 10 шт.
• Пленки для заклеивания стрипа - 10 шт.
• Рамка-держатель для стрипов – 1 шт.
• Бланки учета результатов исследования - 10 шт.

Меры предосторожности

Потенциальный риск применения набора – класс 2а.

Набор СВТ-АЧ предназначен только для in vitro диагностики. Компоненты набора в используемых концентрациях являются нетоксичными.

При работе с набором следует соблюдать "Правила устройства, техники безопасности, производственной санитарии, противоэпидемического режима и личной гигиены при работе в лабораториях (отделениях, отделах) санитарно-эпидемиологических учреждений системы Министерства здравоохранения СССР" (Москва, 1981 г.).

Оборудование и материалы

• термостат, поддерживающий температуру 37 ± 1 °С;
• микроскоп биологический;
• дозаторы пипеточные или пипетки стеклянные.

Проведение анализа

• Приготовление жидкой питательной среды

  Во флакон с лиофилизированной питательной средой для обнаружения T.vaginalis добавить 2,5 мл дистиллированной воды. Содержимое флакона перемешать до полного растворения (в течение 1 мин.).

• Приготовление инокулята

  Для пробы, оцененной как положительная по результатам анализа на жидких питательных средах инокулят готовить cледующим образом: из пробирки, в которой проводилось первичное выделение или накопление культуры отобрать почти всю питательную среду, стараясь не взмучивать и не касаться осадка. В случае если осадка нет, среду следует отбирать, начиная с верхних слоев, оставляя в пробирке 50 мкл среды. К оставшемуся в пробирке осадку или жидкости добавить 500 мкл свежей питательной среды. В правильно приготовленном инокуляте должно быть примерно 10⁵ клеток трихомонад в мл питательной среды, что соответствует 2 - 3 клеткам T.vaginalisв каждом поле зрения микроскопа при исследовании нативного препарата (ув. 400).

• Проведение теста

  Из пакета с молнией взять количество стрипов, равное количеству исследуемых проб, и установить их в рамку-держатель. Во все лунки каждого стрипа (рис. 1) внести по 200 мкл прогретой до 37 °С жидкой питательной среды. Затем во все лунки внести по 50 мкл приготовленного инокулята, который перед внесением перемешать пипетированием. Стрип заклеить пленкой и поставить в термостат при температуре 37 °С.

  Рис. 1. Схема расположения антипротозойных препаратов и контроля в лунках стрипа.

  

• Учет и интерпретация результатов

  Для определения чувствительности штаммов T.vaginalis к антипротозойным препаратам учет результатов проводить через 48 ч. Окончательный учет проводить через 72 ч.

  Для учета результатов содержимое лунок стрипа перемешать 3 кратным пипетированием с помощью 8 канальной пипетки. Затем разместить на столе стрип так, чтобы его маркированная сторона была слева от оператора (рис. 2) и погрузить в лунки стрипа гребенку так, чтобы ее лицевая сторона была направлена в сторону оператора. Зубцы гребенки держать в лунках до тех пор (примерно 30 сек.), пока все пространство каждого зубца не заполнится суспензией. Затем гребенку вынуть из стрипа, слегка промокнуть зубцы фильтровальной бумагой и поместить на предметное стекло. Микроскопию зубцов гребенки проводить в затемненном поле микроскопа при увеличении в 400 - 600 раз. Первоначально необходимо просматривать зубец-контроль (К), затем все остальные зубцы. При наличии T.vaginalis в лунке с препаратом штамм оценивается как резистентный (R); при отсутствии роста T.vaginalis в лунке с препаратом штамм оценивается как чувствительный (S). Подтверждением правильности проведения анализа служит наличие клеток T.vaginalis в контрольной лунке (К).

  Рис. 2. Схема погружение гребенки в лунки стрипа.

  

Условия хранения и эксплуатации набора

• Набор СВТ-АЧ можно хранить при температуре 2 - 8 °С в упаковке предприятия-изготовителя в течение всего срока годности (12 месяцев). Допускается хранение набора при температуре до 25 °С не более 2 недель.
• Растворенную среду хранить до применения при температуре 2 - 8 °С не более 1 недели или при температуре минус 7 °С и ниже не более трех месяцев.
• Для получения надежных результатов необходимо строгое соблюдение инструкции по применению набора.
• По вопросам, касающимся качества набора СВТ-АЧ, следует обращаться во ФБУН НИИЭМ имени Пастера:
  адрес: 197101, Санкт-Петербург, ул. Мира, 14;
  тел./факс: (812) 233-17-03, (812) 325-27-10;
  веб-сайт: http://www.dntpasteur.ru;
  e-mail: pasteurdnt@yandex.ru.