Набор "микоплазма-АЧ-12"

Назначение

Тест-система "микоплазма-АЧ-12" предназначена для одноэтапного обнаружения, идентификации, полуколичественной оценки титра и определения чувствительности Mycoplasma hominis (M. h.) к 12 антибиотикам, наиболее часто назначаемым при лечении урогенитальных микоплазмозов: тетрациклины - доксициклин, тетрациклин; макролиды - джозамицин, мидекамицин; фторхинолоны - офлоксацин, ципрофлоксацин, пефлоксацин, спарфлоксацин, левофлоксацин, моксифлоксацин; линкозамиды - линкомицин, клиндамицин. Все антибиотики представлены в концентрациях, позволяющих оценить исследуемые штаммы M. h. как чувствительные или резистентные.

Тест-система "микоплазма-АЧ-12" рассчитана на проведение 12 анализов, включая контроли.

См. статью: Культуральная диагностика микоплазмоза и уреаплазмоза

Принцип метода

Питательная среда для M. h. обеспечивает оптимальные условия для роста M. h. Селективные компоненты, входящие в состав среды, подавляют рост простейших, грибов, большинства представителей бактериальной флоры и других микоплазм, кроме M. h. В процессе роста M. h. в среде образуются щелочные продукты метаболизма, что проявляется в изменении цвета рН-индикатора от зелёного до фиолетового. Это позволяет проводить обнаружение, идентификацию и полуколичественную оценку титра M. h. по изменению цвета среды в тех лунках стрипов, на поверхности которых не сорбированы антибиотики - лунки К(-), К(+), К(++), К(+++).

В остальных 13 лунках стрипов сорбированы разные антибиотики. После внесения в эти лунки питательной среды с исследуемой пробой сорбированные антибиотики растворяются в среде. В тех лунках, где антибиотики подавляют рост M. h., изменение цвета среды не происходит и штамм считается чувствительным к данным антибиотикам. В тех лунках, где антибиотики не подавляют рост M. h., происходит изменение цвета среды от зеленого до фиолетового и штамм считается резистентным к данным антибиотикам. Концентрации антибиотиков подобраны таким образом, чтобы профиль чувствительности исследуемых штаммов определялся как чувствительный (Sensitive) или резистентный (Resistant).

См. статью: Антибиотики для лечения уреаплазмоза и микоплазмоза

Состав набора

• Стрипы из 16 лунок с сорбированными антибиотиками - 12 шт.
• Вазелиновое масло, стерильное, 22 мл - 1 фл.
• Питательная среда для M. h., лиофилизированная, 25 мл - 1 фл.
• Пробирки для микропроб - 15 шт.
• Инструкция по применению тест-системы "микоплазма-АЧ-12" - 1 шт.

Проведение анализа

• Приготовление пробирок с жидкой питательной средой

  Во флакон с лиофилизированной средой для M. h. добавить 25 мл дистиллированной воды. Содержимое флакона перемешать до полного растворения (в течение 1 мин.). Полученный прозрачный раствор зеленого цвета разлить по 1,5 мл в пробирки для микропроб (12 пробирок для приготовления инокулятов и 3 пробирки для контролей). Пробирки хранить в холодильнике при температуре 4 - 8 °С до 7 сут. или в морозильнике при температуре ниже - 4 °С до 2 мес.

  Перед проведением анализа пробирки со средой выдержать при температуре 18 - 25 °С в течение 1 ч. Раствор в пробирках должен быть прозрачным, зеленого цвета. В случае помутнения раствора или изменения его цвета пробирки со средой в работе не использовать.

• Приготовление инокулята

  Инокулят готовят добавлением в пробирки с жидкой питательной средой для M. h. следующих объемов исследуемой пробы:
  - для биопробы (отделяемое влагалища, отделяемое шейки матки, отделяемое уретры, сперма, моча и др.), которая вносится с помощью ложки Фолькмана или одноразового тампона (щетки) в пробирку, содержащую 0,5 мл транспортной среды "микоплазма-Т" или 0,5 мл жидких питательных сред "микоплазма-50", "микоплазма-среда" производства НИИЭМ им. Пастера, - 150 мкл;
  - для пробы, оцененной как положительная по результатам анализа на жидких питательных средах "микоплазма-50", "микоплазма-среда" производства НИИЭМ им. Пастера, - 150 мкл;
  - для пробы, оцененной как положительная по результатам анализа на плотной питательной среде "микоплазма П-120" производства НИИЭМ им. Пастера, - несколько колоний.

• Проведение теста

  Из запаянного полиэтиленового пакета вырезать необходимое количество стрипов и поместить их в рамку-держатель. Далее описана процедура для одного стрипа (см. рис. 1).

  В лунки стрипа (с отрицательным К(-) и положительными К(+) и К(++) контролями) внести по 90 мкл питательной среды для M. h. (без пробы)*. Во все остальные лунки стрипа (с антибиотиками и К(+++)) внести по 100 мкл приготовленного инокулята, который перед внесением перемешать встряхиванием. Из лунки с К(+++) перенести 10 мкл инокулята в лунку с К(++) и перемешать пипетированием. Затем из лунки К(++) перенести 10 мкл инокулята в лунку с К(+) и перемешать пипетированием.

  Во все лунки стрипа добавить по 2 - 3 капли (50 - 75 мкл) вазелинового масла.

  Стрип в рамке-держателе поместить в термостат при температуре 37 ± 1 °С на 48 - 72 часа.

  *Внимание! Пробирку с оставшейся питательной средой хранить в холодильнике при температуре 4 - 8 °С до 7 сут. или в морозильнике при температуре ниже - 4 °С до 2 мес.

Учет и интерпретация результатов

Для определения чувствительности штаммов M. h. к антибиотикам учет результатов проводить через 48 ч. Окончательный учет результатов проводить через 72 ч.

Изменения цвета среды в лунках стрипа оцениваются визуально: "+" при изменении цвета, "-" при отсутствии изменения цвета.

• Качественный анализ

  Изменение окраски среды (без помутнения) в одной или нескольких лунках с положительными контролями К(+++), К(++) и К(+) при сохранении исходной зеленой окраски среды в лунке К(-) свидетельствует о том, что в исследуемой пробе присутствует M. h., т. е. результат является положительным.

  Отсутствие изменения окраски среды (без помутнения) в лунках К(+++), К(++) и К(+) по сравнению с окраской среды в лунке К(-) свидетельствует о том, что в исследуемой пробе отсутствует M. h., т. е. результат является отрицательным.

  Помутнение среды в любой из контрольных лунок свидетельствует о росте посторонней микрофлоры. В этом случае результаты учету не подлежат. Требуется повторное проведение анализа.

• Полуколичественный анализ

  Изменение окраски среды только в лунке с К(+++) при отсутствии изменения окраски среды в лунках К(++), К(+) и К(-) указывает на то, что титр M. h. в исследуемой пробе составляет не более 10² колониеобразующих единиц в мл (КОЕ/мл).

  Изменение окраски среды в двух лунках К(+++) и К(++) при отсутствии изменения окраски среды в лунках К(+) и К(-) указывает на то, что титр M. h. в исследуемой пробе составляет не более 10³ КОЕ/мл.

  Изменение окраски среды в трех лунках К(+++), К(++) и К(+) при отсутствии изменения окраски среды в лунке К(-) указывает на то, что титр M. h. в исследуемой пробе составляет не менее 10⁴ КОЕ/мл.

• Определение антибиотикочувствительности

  При изменении цвета среды "+" в лунках с антибиотиками штамм M. h. расценивается как резистентный (R). При отсутствии изменения цвета среды "-" - как чувствительный (S).

Примечание. Полуколичественная оценка титра M. h. проводится только для инокулятов, приготовленных из биопроб, помещаемых в транспортную среду "микоплазма-Т" или питательные среды "микоплазма-50", "микоплазма-среда".

Условия хранения и транспортировки

• Набор тест-системы "микоплазма-АЧ-12" хранят при температуре 4 - 8 °С.
• Транспортировку осуществляют всеми видами крытого транспорта при температуре не выше 30 °С, не более 2 недель.
• Срок хранения набора тест-системы "микоплазма-АЧ-12" до растворения лиофилизированных компонентов - 12 мес.
• При нарушении условий транспортирования, хранения, способа приготовления и использования рекламации не принимаются.
• В остальных случаях рекламации на качество набора тест-системы "микоплазма-АЧ-12" направлять по адресу изготовителя:
  197101, Санкт-Петербург, ул. Мира, 14; тел.: (812) 313-69-88, (812) 325-27-10; факс: (812) 313-69-89, (812) 233-17-03
  веб-сайт: http://www.dntpasteur.ru; e-mail: dntpasteur@yandex.ru.