Микоплазма-среда (25 мл)

Назначение питательной среды микоплазма-среда

Набор микоплазма-среда предназначен для одноэтапного визуального выявления Mycoplasma hominis (M. h.) в отделяемом из цервикального канала и влагалища, в семенной жидкости, в секрете предстательной железы, в отделяемом уретры и в центрифугате мочи.

Набор рассчитан на проведение 25 анализов в пробирках для микропроб.

См. статью: Антибиотики для лечения уреаплазмоза и микоплазмоза

Принцип метода

В основе метода лежит использование селективной питательной среды для выявления M. h., которая обеспечивает оптимальные условия для роста M. h. при подавлении роста других микоплазм, дрожжеподобных грибов и большинства представителей бактериальной флоры, потенциально содержащихся в исследуемом образце. Наличие в среде рН-индикатора позволяет проводить визуальную оценку результатов исследования по изменению цвета питательной среды в процессе культивирования.

Состав набора питательной среды микоплазма-среда

• Питательная среда для выявления M. h., лиофилизированная (25 мл) - 1 фл.

Меры предосторожности при работе с питательной средой микоплазма-среда

Потенциальный риск применения набора - класс 2а.

Набор микоплазма-среда предназначен только для in vitro диагностики. Входящие в компоненты набора вещества инактивированы и безопасны. Однако исследуемые клинические материалы, а также сточные растворы, оборудование и материалы, находящиеся с ними в контакте, представляют собой потенциально инфекционный материал, и обращаться с ними следует, соблюдая технику безопасности.

Следует избегать любого контакта компонентов набора со слизистыми оболочками.

При работе с набором следует соблюдать "Правила устройства, техники безопасности, производственной санитарии, противоэпидемического режима и личной гигиены при работе в лабораториях (отделениях, отделах) санитарно-эпидемиологических учреждений системы Министерства здравоохранения СССР" (Москва, 1981 г.).

См. статью: Культуральная диагностика микоплазмоза и уреаплазмоза

Оборудование и материалы для работы с питательной средой микоплазма-среда

• термостат, поддерживающий температуру 37 ± 1 °С;
• дозаторы пипеточные;
• горелка газовая (спиртовка);
• вода дистиллированная;
• пробирки для микропроб;
• транспортная среда для урогенитальных микоплазм.

Проведение анализа на базе питательной среды микоплазма-среда

• Приготовление жидкой питательной среды

  Во флакон с лиофилизированной питательной средой для выявления M. h. внести 25 мл дистиллированной воды. Содержимое флакона перемешать до полного растворения (в течение 1 мин.). Полученный прозрачный раствор зеленого цвета разлить по 0,9 мл в пробирки для микропроб, закрыть и хранить до применения при температуре 2 - 8 °С не более 7 сут. или при температуре минус 7 °С и ниже не более 2 мес.

  Перед проведением анализа пробирки со средой выдержать при комнатной температуре (18 - 25 °С) в течение 1 ч. Раствор в пробирках должен быть прозрачным, зеленого цвета.

  В случае помутнения раствора или изменения его цвета пробирки со средой в работе не использовать!

• Приготовление проб для исследования

  Для выявления M. h. пригодны следующие биологические материалы: отделяемое влагалища, отделяемое шейки матки, отделяемое уретры, сперма, центрифугат мочи. Забор проб осуществлять с помощью ложки Фолькмана или одноразового тампона (щетки)¹.

  Исследуемые пробы внести в пробирки, содержащие 0,5 мл транспортной среды для урогенитальных микоплазм. Пробирки с пробами закрыть, промаркировать и доставить в лабораторию. Время транспортировки не должно превышать 8 - 12 ч при температуре 6 - 10 °С. В лаборатории перенести 100 мкл раствора из пробирки с пробой в транспортной среде в пробирку, содержащую 0,9 мл жидкой питательной среды для выявления M. h.

  В зависимости от целей исследования, дальнейшее определение может быть проведено в варианте качественного или полуколичественного анализа.

  ¹Методические указания от 11.03.2003 г. "Обеспечение качества подготовки образцов биологических материалов для цитологических исследований" МЗ РФ, Москва, 2003 г.

• Качественный анализ

  Пробирки с исследуемыми пробами и одну пробирку без пробы (контроль питательной среды) поместить в термостат при температуре 37 ± 1 °С. Учет результатов проводить через 24 ч. Окончательный учет результатов проводить через 72 ч.

  Положительным результатом "+" считается появление фиолетовой окраски среды в пробирке с исследуемой пробой при сохранении зеленой (исходной) окраски в контрольной пробирке. Отсутствие изменения окраски среды в исследуемой пробе по сравнению с окраской среды в контрольной пробирке оценивается как отрицательный результат "-".

• Полуколичественный анализ

  Для полуколичественной оценки титра делают два последовательных разведения исследуемой пробы с шагом 10. Для этого исходную пробирку с пробой, обозначенную К(+++), встряхнуть и перенести из нее 100 мкл раствора в другую пробирку, обозначенную К(++) и содержащую 0,9 мл питательной среды для выявления M. h., что соответствует разведению в 10 раз. Затем перенести 100 мкл раствора из пробирки К(++) в пробирку, обозначенную К(+) и содержащую 0,9 мл питательной среды для выявления M. h., что соответствует разведению исследуемой пробы в 100 раз.

  Три пробирки с пробами К(+++), К(++) и К(+) и одну пробирку без пробы, обозначенную К(-) и содержащую 0,9 мл питательной среды для выявления M. h., поместить в термостат при температуре 37 ± 1 °С. Результаты анализа учитывать через 24 ч. Окончательный учет результатов проводить через 72 ч.

  Появление фиолетовой окраски среды только в пробирке К(+++) при отсутствии изменений в окраске среды в пробирках К(++), К(+) и К(-) указывает на то, что титр M. h. составляет не более 10² колониеобразующих единиц в мл (КОЕ/мл). Появление фиолетовой окраски среды в двух пробирках К(+++) и К(++) при отсутствии изменений в окраске среды в пробирках К(+) и К(-) указывает на то, что титр M. h. составляет не более 10³ КОЕ/мл. Появление фиолетовой окраски среды в трех пробирках К(+++), К(++) и К(+) при отсутствии изменения в окраске среды в пробирке К(-) свидетельствует о том, что титр M. h. составляет не менее 10⁴ КОЕ/мл.

  Отсутствие изменения окраски среды в трех пробирках с пробой К(+++), К(++) и К(+) по сравнению с окраской среды в контрольной пробирке К(-) считается отрицательным результатом "-".

Примечание. Помутнение среды во время культивирования (при изменении или без изменения окраски в пробирках с исследуемыми пробами) свидетельствует о росте посторонней микрофлоры. Результаты исследования таких проб учету не подлежат и требуют повторного проведения анализа или дополнительного посева на плотную питательную среду для морфологической идентификации колоний M. h.

Набор микоплазма-среда можно использовать для определения антибиотикочувствительности U. u. к 8 антибиотикам в тест-системе микоплазма/уреаплазма - ач согласно инструкции по применению данной тест-системы.

Условия хранения и эксплуатации набора питательной среды микоплазма-среда

• Набор микоплазма-среда следует хранить при температуре 2 - 8 °С в упаковке предприятия-изготовителя в течение всего срока годности. Допускается хранение набора при температуре до 25 °С не более 2 недель. Срок годности набора - 12 мес.
• Приготовленную питательную среду можно хранить при температуре 2 - 8 °С не более 1 недели или при температуре минус 7 °С и ниже не более 2 мес.
• Для получения надежных результатов необходимо строгое соблюдение инструкции по применению набора.
• По вопросам, касающимся качества набора микоплазма-среда, следует обращаться в ФГУН НИИЭМ имени Пастера Роспотребнадзора:
  адрес: 197101, Санкт-Петербург, ул. Мира, 14;
  тел./факс: (812) 233-17-03, (812) 313-69-89;
  телефон (812) 325-27-10, (812) 313-69-88;
  веб-сайт: http://www.dntpasteur.ru;
  e-mail: pasteurdnt@yandex.ru.