Набор реагентов микоплазма - м. Комплект № 2

Назначение набора микоплазма - м

Набор реагентов микоплазма - м (комплект № 2) предназначен для одноэтапного визуального выявления Mycoplasma hominis (M. h.) в отделяемом из цервикального канала и влагалища, в семенной жидкости, в секрете предстательной железы, в отделяемом уретры и в центрифугате мочи.

Комплект № 2 рассчитан на проведение 96 анализов в лунках планшета.

См. статью: Антибиотики для лечения уреаплазмоза и микоплазмоза

Принцип метода

В основе метода лежит использование селективной питательной среды для выявления M. h., которая обеспечивает оптимальные условия для роста M. h. при подавлении роста других микоплазм, дрожжеподобных грибов и большинства представителей бактериальной флоры, потенциально содержащихся в исследуемом образце. Наличие в среде рН-индикатора позволяет проводить визуальную оценку результатов исследования по изменению цвета питательной среды в процессе культивирования.

Состав набора микоплазма - м. Комплект № 2

Питательная среда для выявления M. h., лиофилизированная (10 мл) - 1 фл.
96-луночный полимерный плоскодонный планшет - 1 шт.
Пробирки для микропроб - 10 шт.
Этикетки для маркировки пробирок - 10 шт.
Масло вазелиновое - 1 фл.

Меры предосторожности при работе с набором микоплазма - м

Потенциальный риск применения набора - класс 2а.

Набор микоплазма - м (комплект № 2) предназначен только для in vitro диагностики. Входящие в компоненты набора вещества инактивированы и безопасны. Однако исследуемые клинические материалы, а также сточные растворы, оборудование и материалы, находящиеся с ними в контакте, представляют собой потенциально инфекционный материал, и обращаться с ними следует, соблюдая технику безопасности.

Следует избегать любого контакта компонентов набора со слизистыми оболочками.

При работе с набором следует соблюдать "Правила устройства, техники безопасности, производственной санитарии, противоэпидемического режима и личной гигиены при работе в лабораториях (отделениях, отделах) санитарно-эпидемиологических учреждений системы Министерства здравоохранения СССР" (Москва, 1981 г.).

Оборудование и материалы для работы с набором микоплазма - м

термостат, поддерживающий температуру 37 ± 1 °С;
дозаторы пипеточные;
горелка газовая (спиртовка);
вода дистиллированная;
транспортная среда для урогенитальных микоплазм.

Проведение анализа на базе набора микоплазма - м

Приготовление жидкой питательной среды
Во флакон с лиофилизированной питательной средой для выявления M. h. внести 10 мл дистиллированной воды. Содержимое флакона перемешать до полного растворения (в течение 1 мин.). Полученный прозрачный раствор зеленого цвета разлить по 1,0 мл в пробирки для микропроб, закрыть и хранить до применения при температуре 2 - 8 °С не более 7 сут. или при температуре минус 7 °С и ниже не более 2 мес.

Перед проведением анализа пробирки со средой выдержать при комнатной температуре (18 - 25 °С) в течение 1 ч. Раствор в пробирках должен быть прозрачным, зеленого цвета.

В случае помутнения раствора или изменения его цвета пробирки со средой в работе не использовать!
Приготовление проб для исследования
Для выявления M. h. пригодны следующие биологические материалы: отделяемое влагалища, отделяемое шейки матки, отделяемое уретры, сперма, центрифугат мочи. Забор проб осуществлять с помощью ложки Фолькмана или одноразового тампона (щетки)¹.

Исследуемые пробы внести в пробирки, содержащие 0,5 мл транспортной среды для урогенитальных микоплазм. Пробирки с пробами закрыть, промаркировать и доставить в лабораторию. Время транспортировки не должно превышать 8 - 12 ч при температуре 6 - 10 °С.

В зависимости от целей исследования, дальнейшее определение может быть проведено в варианте качественного или полуколичественного анализа.

¹Методические указания от 11.03.2003 г. "Обеспечение качества подготовки образцов биологических материалов для цитологических исследований" МЗ РФ, Москва, 2003 г.
Качественный анализ
В зависимости от числа исследуемых проб удалить защитную пленку с необходимого количества лунок, плюс одна лунка для контроля питательной среды К(-), общая на данный день исследования.

Из пробирки, содержащей 1,0 мл питательной среды для выявления M. h., внести 100 мкл в контрольную лунку К(-), в остальные лунки - по 90 мкл раствора. Затем в каждую лунку, кроме контрольной, добавить по 10 мкл раствора из пробирок с пробами в транспортной среде для урогенитальных микоплазм из расчета: одна лунка - одна проба. Каждое внесение проводить с помощью индивидуального наконечника для пипетки, тщательно перемешивая раствор в лунке пипетированием.

Во все лунки добавить по 2 - 3 капли (50 - 75 мкл) вазелинового масла. Планшет поместить в термостат при температуре 37 ± 1 °С. Учет результатов проводить через 24 ч. Окончательный учет результатов проводить через 48 ч.

Положительным результатом "+" считается появление фиолетовой окраски среды в лунке с исследуемой пробой при сохранении зеленой (исходной) окраски среды в контрольной лунке К(-). Отсутствие изменения окраски среды в исследуемой лунке с пробой по сравнению с окраской среды в контрольной лунке К(-) оценивается как отрицательный результат "-".
Полуколичественный анализ
В зависимости от числа исследуемых проб удалить защитную пленку с необходимого количества лунок из расчета: три лунки (К(+++); К(++); К(+)) - одна проба, плюс одна лунка для контроля питательной среды К(-), общая на данный день исследования.

Из пробирки, содержащей 1,0 мл питательной среды, внести 100 мкл раствора в контрольную лунку К(-), в остальные открытые лунки - по 90 мкл.
Анализ для одной пробы
Из пробирки с пробой в транспортной среде для урогенитальных микоплазм внести 10 мкл раствора в лунку К(+++), тщательно перемешать пипетированием и перенести 10 мкл раствора из лунки К(+++) в следующую лунку К(++) (разведение в 10 раз) и перемешать пипетированием. Затем перенести 10 мкл раствора из лунки К(++) в лунку К(+) (разведение в 100 раз) и перемешать пипетированием. Для каждой пробы внесение проводить с помощью индивидуального наконечника для пипетки.

Во все лунки, включая контрольную К(-), добавить по 2 - 3 капли (50 - 75 мкл) вазелинового масла. Планшет поместить в термостат при температуре 37 ± 1 °С. Результаты анализов учитывать через 24 ч. Окончательный результат анализов проводить через 48 ч.

Появление фиолетовой окраски среды только в лунке К(+++) при отсутствии изменений в окраске в лунках К(++), К(+) и К(-) указывает на то, что титр M. h. составляет не более 10² колониеобразующих единиц в мл (КОЕ/мл). Появление фиолетовой окраски среды в лунках К(+++) и К(++) при отсутствии изменений в окраске в лунках К(+) и К(-) указывает на то, что титр М. h. составляет не более 10³ КОЕ/мл. Появление фиолетовой окраски среды в лунках К(+++), К(++) и К(+) при отсутствии изменения в окраске в контрольной лунке К(-) указывает на то, что титр М. h. составляет не менее 10⁴ КОЕ/мл.

Отсутствие изменения окраски среды в трех лунках с пробой К(+++), К(++) и К(+) по сравнению с окраской среды в контрольной пробирке К(-) оценивается как отрицательный результат "-".

Примечание. Помутнение среды во время культивирования (при изменении или без изменения окраски в пробирках с исследуемыми пробами) свидетельствует о росте посторонней микрофлоры. Результаты исследования таких проб учету не подлежат и требуют повторного проведения анализа или дополнительного посева на плотную питательную среду для морфологической идентификации колоний M. h.

См. статью: Культуральная диагностика микоплазмоза и уреаплазмоза

Условия хранения и эксплуатации набора микоплазма - м

Набор микоплазма - м (комплект № 2) следует хранить при температуре 2 - 8 °С в упаковке предприятия-изготовителя в течение всего срока годности. Допускается хранение набора при температуре до 25 °С не более 2 недель. Срок годности набора - 12 мес.
Приготовленную питательную среду можно хранить при температуре 2 - 8 °С не более 1 недели или при температуре минус 7 °С и ниже не более 2 мес.
Для получения надежных результатов необходимо строгое соблюдение инструкции по применению набора.
По вопросам, касающимся качества набора микоплазма - м (комплект № 2), следует обращаться в ФГУН НИИЭМ имени Пастера Роспотребнадзора:
адрес: 197101, Санкт-Петербург, ул. Мира, 14;
тел./факс: (812) 233-17-03, (812) 313-69-89;
телефон (812) 325-27-10, (812) 313-69-88;
веб-сайт: http://www.dntpasteur.ru;
e-mail: pasteurdnt@yandex.ru.