Набор реагентов микоплазма - м. Комплект № 2
Назначение набора микоплазма - м
Набор реагентов микоплазма - м (комплект № 2) предназначен для одноэтапного визуального выявления Mycoplasma hominis (M. h.) в отделяемом из цервикального канала и влагалища, в семенной жидкости, в секрете предстательной железы, в отделяемом уретры и в центрифугате мочи.
Комплект № 2 рассчитан на проведение 96 анализов в лунках планшета.
См. статью: Антибиотики для лечения уреаплазмоза и микоплазмоза
Принцип метода
В основе метода лежит использование селективной питательной среды для выявления M. h., которая обеспечивает оптимальные условия для роста M. h. при подавлении роста других микоплазм, дрожжеподобных грибов и большинства представителей бактериальной флоры, потенциально содержащихся в исследуемом образце. Наличие в среде рН-индикатора позволяет проводить визуальную оценку результатов исследования по изменению цвета питательной среды в процессе культивирования.
Состав набора микоплазма - м. Комплект № 2
- Питательная среда для выявления M. h., лиофилизированная (10 мл) - 1 фл.
- 96-луночный полимерный плоскодонный планшет - 1 шт.
- Пробирки для микропроб - 10 шт.
- Этикетки для маркировки пробирок - 10 шт.
- Масло вазелиновое - 1 фл.
Меры предосторожности при работе с набором микоплазма - м
Потенциальный риск применения набора - класс 2а.
Набор микоплазма - м (комплект № 2) предназначен только для in vitro диагностики. Входящие в компоненты набора вещества инактивированы и безопасны. Однако исследуемые клинические материалы, а также сточные растворы, оборудование и материалы, находящиеся с ними в контакте, представляют собой потенциально инфекционный материал, и обращаться с ними следует, соблюдая технику безопасности.
Следует избегать любого контакта компонентов набора со слизистыми оболочками.
При работе с набором следует соблюдать "Правила устройства, техники безопасности, производственной санитарии, противоэпидемического режима и личной гигиены при работе в лабораториях (отделениях, отделах) санитарно-эпидемиологических учреждений системы Министерства здравоохранения СССР" (Москва, 1981 г.).
Оборудование и материалы для работы с набором микоплазма - м
- термостат, поддерживающий температуру 37 ± 1 °С;
- дозаторы пипеточные;
- горелка газовая (спиртовка);
- вода дистиллированная;
- транспортная среда для урогенитальных микоплазм.
Проведение анализа на базе набора микоплазма - м
-
Приготовление жидкой питательной среды
Во флакон с лиофилизированной питательной средой для выявления M. h. внести 10 мл дистиллированной воды. Содержимое флакона перемешать до полного растворения (в течение 1 мин.). Полученный прозрачный раствор зеленого цвета разлить по 1,0 мл в пробирки для микропроб, закрыть и хранить до применения при температуре 2 - 8 °С не более 7 сут. или при температуре минус 7 °С и ниже не более 2 мес.
Перед проведением анализа пробирки со средой выдержать при комнатной температуре (18 - 25 °С) в течение 1 ч. Раствор в пробирках должен быть прозрачным, зеленого цвета.
В случае помутнения раствора или изменения его цвета пробирки со средой в работе не использовать!
-
Приготовление проб для исследования
Для выявления M. h. пригодны следующие биологические материалы: отделяемое влагалища, отделяемое шейки матки, отделяемое уретры, сперма, центрифугат мочи. Забор проб осуществлять с помощью ложки Фолькмана или одноразового тампона (щетки)1.
Исследуемые пробы внести в пробирки, содержащие 0,5 мл транспортной среды для урогенитальных микоплазм. Пробирки с пробами закрыть, промаркировать и доставить в лабораторию. Время транспортировки не должно превышать 8 - 12 ч при температуре 6 - 10 °С.
В зависимости от целей исследования, дальнейшее определение может быть проведено в варианте качественного или полуколичественного анализа.
1Методические указания от 11.03.2003 г. "Обеспечение качества подготовки образцов биологических материалов для цитологических исследований" МЗ РФ, Москва, 2003 г.
-
Качественный анализ
В зависимости от числа исследуемых проб удалить защитную пленку с необходимого количества лунок, плюс одна лунка для контроля питательной среды К(-), общая на данный день исследования.
Из пробирки, содержащей 1,0 мл питательной среды для выявления M. h., внести 100 мкл в контрольную лунку К(-), в остальные лунки - по 90 мкл раствора. Затем в каждую лунку, кроме контрольной, добавить по 10 мкл раствора из пробирок с пробами в транспортной среде для урогенитальных микоплазм из расчета: одна лунка - одна проба. Каждое внесение проводить с помощью индивидуального наконечника для пипетки, тщательно перемешивая раствор в лунке пипетированием.
Во все лунки добавить по 2 - 3 капли (50 - 75 мкл) вазелинового масла. Планшет поместить в термостат при температуре 37 ± 1 °С. Учет результатов проводить через 24 ч. Окончательный учет результатов проводить через 48 ч.
Положительным результатом "+" считается появление фиолетовой окраски среды в лунке с исследуемой пробой при сохранении зеленой (исходной) окраски среды в контрольной лунке К(-). Отсутствие изменения окраски среды в исследуемой лунке с пробой по сравнению с окраской среды в контрольной лунке К(-) оценивается как отрицательный результат "-".
-
Полуколичественный анализ
В зависимости от числа исследуемых проб удалить защитную пленку с необходимого количества лунок из расчета: три лунки (К(+++); К(++); К(+)) - одна проба, плюс одна лунка для контроля питательной среды К(-), общая на данный день исследования.
Из пробирки, содержащей 1,0 мл питательной среды, внести 100 мкл раствора в контрольную лунку К(-), в остальные открытые лунки - по 90 мкл.
-
Анализ для одной пробы
Из пробирки с пробой в транспортной среде для урогенитальных микоплазм внести 10 мкл раствора в лунку К(+++), тщательно перемешать пипетированием и перенести 10 мкл раствора из лунки К(+++) в следующую лунку К(++) (разведение в 10 раз) и перемешать пипетированием. Затем перенести 10 мкл раствора из лунки К(++) в лунку К(+) (разведение в 100 раз) и перемешать пипетированием. Для каждой пробы внесение проводить с помощью индивидуального наконечника для пипетки.
Во все лунки, включая контрольную К(-), добавить по 2 - 3 капли (50 - 75 мкл) вазелинового масла. Планшет поместить в термостат при температуре 37 ± 1 °С. Результаты анализов учитывать через 24 ч. Окончательный результат анализов проводить через 48 ч.
Появление фиолетовой окраски среды только в лунке К(+++) при отсутствии изменений в окраске в лунках К(++), К(+) и К(-) указывает на то, что титр M. h. составляет не более 102 колониеобразующих единиц в мл (КОЕ/мл). Появление фиолетовой окраски среды в лунках К(+++) и К(++) при отсутствии изменений в окраске в лунках К(+) и К(-) указывает на то, что титр М. h. составляет не более 103 КОЕ/мл. Появление фиолетовой окраски среды в лунках К(+++), К(++) и К(+) при отсутствии изменения в окраске в контрольной лунке К(-) указывает на то, что титр М. h. составляет не менее 104 КОЕ/мл.
Отсутствие изменения окраски среды в трех лунках с пробой К(+++), К(++) и К(+) по сравнению с окраской среды в контрольной пробирке К(-) оценивается как отрицательный результат "-".
Примечание. Помутнение среды во время культивирования (при изменении или без изменения окраски в пробирках с исследуемыми пробами) свидетельствует о росте посторонней микрофлоры. Результаты исследования таких проб учету не подлежат и требуют повторного проведения анализа или дополнительного посева на плотную питательную среду для морфологической идентификации колоний M. h.
См. статью: Культуральная диагностика микоплазмоза и уреаплазмоза
Условия хранения и эксплуатации набора микоплазма - м
- Набор микоплазма - м (комплект № 2) следует хранить при температуре 2 - 8 °С в упаковке предприятия-изготовителя в течение всего срока годности. Допускается хранение набора при температуре до 25 °С не более 2 недель. Срок годности набора - 12 мес.
- Приготовленную питательную среду можно хранить при температуре 2 - 8 °С не более 1 недели или при температуре минус 7 °С и ниже не более 2 мес.
- Для получения надежных результатов необходимо строгое соблюдение инструкции по применению набора.
-
По вопросам, касающимся качества набора микоплазма - м (комплект № 2), следует обращаться в ФГУН НИИЭМ имени Пастера Роспотребнадзора:
адрес: 197101, Санкт-Петербург, ул. Мира, 14;
тел./факс: (812) 233-17-03, (812) 313-69-89;
телефон (812) 325-27-10, (812) 313-69-88;
веб-сайт: http://www.dntpasteur.ru;
e-mail: pasteurdnt@yandex.ru.