Получение мономолекулярного слоя первого специфического реагента и устранение последующих взаимодействий реагент - твердая фаза

Как уже указывалось, в результате сорбции первого специфического реагента (С.Р.) происходит образование вначале мономолекулярного слоя на твердой фазе, а затем многослойной сорбции за счет белок - белковых взаимодействий [38]. Каждый процесс характеризуется своей константой равновесия, причем К1 > К2

Добавление в промывной раствор неионных детергентов типа Твин-20 позволяет осуществлять эффективную конкуренцию между белок-белковыми взаимодействиями за счет взаимодействия белок-детергент. Это же взаимодействие уменьшает сорбцию белка на твердой поверхности после частичного разрушения мономолекулярного слоя. Так как все эти процессы равновесные, то для более полного устранения многослойной сорбции необходима многократная промывка твердой фазы до 5 - 6 раз вместо 2 - 3 кратной, как обычно рекомендуют.

Для заполнения части образовавшихся свободных активных центров после этапа промывки иммуносорбента иногда проводят этап их блокирования с помощью неспецифических реагентов, таких как различные белки (бычий сывороточный альбумин, овальбумин и др.)казеин и т.д. С этой целью балластные белки в концентрации 1 - 2 % вводят в некоторых случаях в состав промывных и инкубирующих растворов на последующих стадиях анализа. Этого можно избежать, используя промывной раствор, в котором наряду с детергентами содержатся хаотропные ионы типа Сl- в высокой концентрации (0,01 М Nа-фосфатный буфер, рН = 7,2 - 7,4, содержащий 0,05 % твина и 0,65 М NaCl).

Назад

Регистрационные удостоверения
Награды сотрудников отдела
  • Лучший доклад молодых ученых «Новые концепции механизмов воспаления, аутоиммунного ответа и развития опухоли» V Международной научно-практической конференции. Государственное бюджетное образовательное учреждение дополнительного профессионального образован
  • Диплом победителя конкурса «Лучшая работа молодого ученого» Всероссийской научно-практической конференции молодых ученых и специалистов Роспотребнадзора «Актуальные проблемы эпидемиологии и профилактической медицины», г. Ставрополь, 22 – 24 октября 2014 г
  • Диплом «Победитель конкурса грантов Санкт-Петербурга для студентов, аспирантов, молодых ученых, молодых кандидатов наук 2014 г.»
  • Победитель Конкурса грантов Санкт-Петербурга для студентов, аспирантов, молодых ученых, молодых кандидатов наук 2010 г. Махлай Наталья Сергеевна
  • Победитель XIV Конкурса бизнес-идей, научно-технических разработок и научно-исследовательских проектов Молодые, дерзкие, перспективные. Ольга Валентиновна Заручейнова
  • Финалист XIV Конкурса бизнес-идей, научно-технических разработок и научно-исследовательских проектов Молодые, дерзкие, перспективные. Наталья Сергеевна Махлай
  • Победитель программы Участник молодежного научно-инновационного конкурса (УМНИК). Васильева Елена Викторовна. НИИ эпидемиологии и микробиологии им. Пастера
ФБУН НИИ эпидемиологии и микробиологии имени Пастера
Отдел новых технологий
Факс
(812) 313-69-89
(812) 233-17-03